鼠尾基因组DNA提取试剂盒说明书
货号: M02950
规格：50T
英文名称：Mouse Tail Genomic DNA Kit
保存：室温（15-30℃）;未开封，效期1年
产品内容：
Component | 50 preps |
Buffer GTT | 15 ml |
Buffer GL | 15 ml |
Buffer GW1（concentrate） | 13 ml |
Buffer GW2（concentrate） | 15 ml |
Buffer GE | 15 ml |
Proteinase K | 25 mg |
Proteinase K Storage Buffer | 1.25 ml |
Spin Columns DM with Collection Tubes | 50 |
产品说明（仅供参考）:
该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的小鼠或大鼠鼠尾中提取高纯度的总DNA。该试剂盒提供的方法简单易行，纯化过程无需苯酚或氯仿抽提，可获得最大为50 kb的DNA片段，同时对100 bp的片段也能有效回收。本试剂盒采用独特的裂解液，有效裂解鼠尾样本，优化的缓冲体系使裂解鼠尾后产生的DNA高效结合到硅基质吸附柱上，而其他污染物可流过膜；PCR和其他酶促反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤被有效去除，最后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可得到高纯度的DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。
自备试剂：无水乙醇。
实验前准备及重要注意事项
1．向Proteinase K中加入1.25 ml Proteinase K Storage Buffer使其溶解，-20℃保存。
配制好的Proteinase K勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
3．第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
4．使用前请检查Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GL
于56℃水浴重新溶解。
操作步骤
1．取一段大鼠或两段小鼠长度为0.4-0.6 cm的尾巴，在液氮中研磨成细粉或剪碎放入离
心管（自备）中。加入180 μl Buffer GTT，振荡混匀。
注意：确保组织的起始量不要超出推荐范围。
2．加入20 μl Proteinase K，涡旋振荡，彻底混匀。
3．置于56℃水浴，直至组织溶液完全清澈，一般情况下需要消化6-8小时，孵育过程中涡旋震荡，使样品均匀分散。
注意：1）如果孵育和涡旋震荡后仍然有胶状物质，必要时过夜消化或再加入20 μl Proteinase K消化，不会影响后续操作。
2）如需去除RNA，在上述步骤完成后加入4 μl 100 mg/ml 的RNase A溶液，震荡混匀，室温放置5-10分钟。
4．12,000 rpm (~13,400×g)离心1分钟，以除掉未消化的类似于鼠毛等组织。将上清转移到一个新的离心管（自备）中。
5．加入200 μl Buffer GL，涡旋震荡，充分混匀。加入200 μl无水乙醇，涡旋震荡，充分混匀。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：
1）加入Buffer GL和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀。
2）如果多个样品一起操作，Buffer GL和无水乙醇可以等比例混匀后一起加入样品。
3）加入Buffer GL和无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。
6．将步骤5中所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱（Spin Columns DM）中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7．向吸附柱中加入500 μl Buffer GW1（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8．向吸附柱中加入500 μl Buffer GW2（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤8。
9．12,000 rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应（酶切、PCR等）。
10．将吸附柱置于一个新的离心管（自备）中，向吸附柱的中间部位悬空加入50-200 μl Buffer GE或灭菌水，室温放置2-5分钟，12,000 rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1）如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2）离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3）用另外的50-200 μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4）如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤10；
若洗脱体积小于200 μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1 μg，
推荐用50 μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
5）因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于
-20℃保存。