总RNA提取试剂盒

总RNA提取试剂盒说明书

货号：M03220

规格：50T/100T

保存：2-8℃，有效期1年。

产品内容：

操作步骤：

1. 样品处理：
2. 植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀；样品体积不应超过裂解液体积的十分之一。
3. 动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理；样品体积不应超过裂解液体积的十分之一。

c. 贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每10⁶ 细胞加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。d. 细胞悬液：离心收集细胞。每10⁶ 动物、植物和酵母细胞或每10⁷ 细菌细胞加1ml裂解液混匀。加裂解液前不要洗涤细胞，以免降解mRNA。e. 血液处理：取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液（推荐0.25 ml血液＋0.75 ml 裂解液），混匀后室温放置10分钟，10000rpm离心1分钟。弃上清，若沉淀含有红细胞，可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1 ml裂解液混匀。

1. 将处理后的样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。

可选步骤： 4℃ 12,000 rpm (~13,400×g) 离心5 min，取上清，转入一个新的无RNase的离心管中。注意：如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等，可加此步骤离心去除。离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA，RNA存在于上清溶液中。

1. 向匀浆样品中加0.2ml氯仿替代物（自备），盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟。
2. 2-8℃ 12000 rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中，把水相转移到新管中，不要吸到沉淀。样品会分成三层：黄色的有机相，中间层和无色的水相，RNA主要在水相中，水相的体积约为所用裂解液试剂的50%。把水相转移到新管中，进行下一步操作。
3. 吸附柱前处理：在吸附柱中加入500µL 洗柱液，室温放置2分钟，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。
4. 第4步收集的上清中，按400µL上清加入200µL无水乙醇混匀（即0.5倍体积无水乙醇，此时可能会出现沉淀，将得到溶液和沉淀一起转入吸附柱，若一次不能将全部溶液和混合物加入吸附柱，请分两次转入吸附柱），加入吸附柱静置2分钟，2-8℃ 12000rpm离心2min，弃废液。
5. 向吸附柱中加入600µL漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇，一般为60mL)，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。
6. 重复上述步骤。
7. 2-8℃，12000rpm，空管离心2min，弃掉收集管，将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除，离心后将吸附柱在室温放置片刻，或置于超净工作台上通风片刻，以充分晾干。如果有漂洗液残留，可能会影响后续的RT-PCR等实验操作

10、将吸附柱放入新1.5mL管中，向膜中央滴加50-100µL RNase free ddH₂O，室温放置5min，然后 2-8℃ 12,000 rpm (~13,400×g)即得到RNA。

注意事项：

1. 所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品，操作过程要小心，带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。
2. RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯，需电泳检测。
3. 洗脱缓冲液体积不应少于30µL，体积过小影响回收效率。且RNA应保存在-70℃，以防降解。如果想提高RNA得率，可重复步骤10操作一次，合并两次得到的溶液。