超纯总RNA提取试剂盒 (无需巯基乙醇、氯仿 )

超纯总RNA提取试剂盒说明书

货号:M03230

规格：50T/200T

英文名称：Ultrapure RNA Kit

保存：GTRIzon PaI及GTRIzon Reagent 2-8℃避光保存，其他组分室温（15-30℃）

产品组成：

产品说明（仅供参考）:

该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

本试剂盒是基于TRIzon改进后的柱式总RNA提取试剂盒，裂解液充分裂解并匀质化样本，采用独特的硅基质膜吸附技术，通过离心吸附柱在高盐状态下高效专一的结合溶液中的RNA，同时最大限度的有效除去蛋白质、无机盐离子及有机杂质等；可从动物组织、植物材料、各种微生物及培养细胞等样品中快速提取总RNA，每次可处理30-50 mg组织或5×10⁶细胞，可同时处理多个不同样品。本试剂盒提取得到的RNA可直接应用于RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译等实验。

纯度高：最大限度除去蛋白质等杂质，提取的RNA可直接用于下游各种实验。

提取量大：独特的裂解液配方，充分裂解细胞或组织，RNA提取量多至100 μg。

快速：步骤少，操作简单，节省时间。

兼容性强：适用于多种动植物组织和细胞RNA的提取。

自备试剂：70%乙醇(无RNase水配制)、无水乙醇。

实验前准备及重要注意事项

1. 预防RNase污染，应注意以下几方面:

1) 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。

2)玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。

3)配制溶液应使用无RNase的水。

4) 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套

2. 样品应避免反复冻融，否则影响RNA提取得率和质量

3. 使用前若发现GTRIzon Reagent有沉淀，可置于56℃水浴几分钟，即可溶解。

4. 第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer RW2中加入无水乙醇。

5. 所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。

6. 若下游实验对DNA非常敏感，建议用不含RNase的DNase l(货号: EZ1052) 对 RNA进行处理。

使用方法

1样品处理

1a. 植物组织: 取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在GTRIzon Reagent中迅速研磨，每30-50 mg组织加入1 mL GTRIzon Reagent，混匀。

注意:样品体积不超过GTRIzon Reagent体积的10%

1b. 动物组织: 取新鲜或-70℃冻存的动物组织尽量剪碎，每30-50mg组织加入1 mL GTRIzon Reagent，匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨后加入GTRIzon Reagent 1 mL混匀。

注意:样品体积一般不要超过GTRIzon Reagent体积的10%。

1c. 单层培养细胞:吸去培养液，可直接在培养板中加入适量GTRIzon Reagent (每10 cm面积需要1 mL GTRIzon Reagent) ，用取样器反复吹打使细胞裂解。也可用胰蛋白酶处理后，将细胞溶液转移至RNase-Free的离心管中，300xg离心5 min，收集细胞沉淀仔细吸除所有上清，加入GTRIzon Reagent 1 mL混匀。

注意 :

1)收集细胞数量不要超过1×10⁷。

2)GTRIzon Reagent加量根据培养板面积决定，不是由细胞决定，如果GTRIzon Reagent加量不足可能导致提取的RNA中有DNA污染

3)收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，否则会导致裂解不完全，造成RNA的产量降低.

1d. 细胞悬液:离心收集细胞。每5×10⁶-1×10⁷动物、植物和酵母细胞或每10⁷细菌细胞加入1 mL GTRIzon Reagent.

注意:

1)加入GTRIzon Reagent前不要洗涤细胞，以免RNA降解

2）一些酵母和细菌细胞可能需要匀浆仪或液氮研磨处理。

1e. 血液处理: 直接取新鲜的血液，加入3倍体积的GTRIzon Reagent (推荐0.25 mL全血加入0.75 mL GTRIzon Reagent) ，充分振荡混匀。

1f. 可选步骤: 对于蛋白、脂肪、多糖或胞外物质含量高的样品，如肌肉组织、脂肪组织或植物的块茎，可以在匀浆处理后4℃，12,000 rpm (~13,400xg) 离心10分钟以除去不溶物质，此时沉淀中含胞外物质、多糖和高分子量的DNA，而RNA存在于上清中。

1. 样品中加入GTRIzon Reagent后反复吹打几次，使样本充分裂解。室温放置5分钟，使蛋白核酸复合物完全分离。
2. 每1 mL GTRIzon Reagent加入200 µL GTRIzon Pal ，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置2分钟。
3. 4℃ 12,000rpm (~13,400xg) 离心10分钟，此时样品分为三层: 红色有机相，中间层和上层无色水相，RNA主要在上层水相中，将上层水相移到一个新的RNase- Free离心管(自备) 中。
4. 在得到的水相溶液中加入等体积的70%乙醇(无RNase水配制)，颠倒混匀。
5. 将上步所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱(Spin Columns RM) 中。若一次不能加完溶液，可分多次转入。12,000 rpm离心20秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

7.向吸附柱中加入700µL Buffer RW1，12,000 rpm离心20秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

8. 向吸附柱中加入500 µL Buffer RW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12,000 rpm离心20秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

9. 重复步骤8。

10. 12,000rpm离心2 分钟，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟，彻底晾干.

注意:这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应( 酶切、PCR等)

1. 将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中，向吸附柱的中间部位加入30-50 µL RNase-Free Water，室温放置1分钟，12,000 rpm离心1分钟，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。

注意:

1)RNase-Free Wate体积不应小于30 µL，体积过小影响回收率。

2)如果要提高RNA的产量，可用30-50 µL新的RNase-Free Water重复步骤11.

3)如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤11。

4）本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。