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细菌RNA提取试剂盒 (DNase I )

规格	单位	价格（元）	操作
50T	盒	¥1696.6	询价

产品详情

细菌RNA提取试剂盒（DNase I）说明书

货号：M03240

规格：50T

保存：RT，有效期1年。（DNase I及10×Reaction Buffer -20℃保存。）

产品组成：

名称	规格	保存
DNase I(1U/μL)	1000U	-20℃
10×Reaction Buffer	1000 μL	-20℃
Buffer RL	35mL	RT
Buffer RW1	40mL	RT
Buffer RW2(concentrate)	11mL	RT
RNase-Free Water	10mL	RT
Spin Columns FL with Collection Tubes	50	RT
Spin Columns RM with Collection Tubes	50	RT
RNase-Free Centrifuge Tubes(1.5 mL)	100	RT

产品简介：

本试剂盒采用高效、专一结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲系统，可从细菌或培养的动物细胞中快速提取总RNA。30-40分钟内即可完成反应，提取的总RNA纯度极高，没有蛋白质和其他污染，适用于RT-PCR、Real-Time RT-PCR、芯片分析、体外翻译等实验。

自备试剂：

溶菌酶、TE缓冲液、β-巯基乙醇、无水乙醇（新开封或提取RNA专用）

操作步骤：

注意：上清如果有残留，会影响后续的消化过程。

加入350 μL Buffer RL（使用前请检查是否加入β-巯基乙醇），涡旋震荡混匀（此步骤可能出现不溶性沉淀），将溶液与沉淀全部加入到已装入收集管的过滤柱（Spin Columns FL）中，12,000 rpm离心2分钟。

注：Buffer RL在使用前请加入β-巯基乙醇至终浓度为1%，如1 ml Buffer RL加10 μL β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer RL 4℃可保存1个月，如出现沉淀，请加热溶解后使用。

向上步得到的滤液中加入250 μL无水乙醇，混匀（此时可能会出现沉淀）。将得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱（Spin Columns RM）中，12,000 rpm离心1分钟，弃掉废液，将吸附柱重新放回收集管中。
向吸附柱中加入350 μL Buffer RW1，12,000 rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
配制DNase I 混合液：取52 μL RNase-Free Water，向其中加入8 μL 10×Reaction Buffer和20 μL DNase I（1 U/μL），混匀，配制成终体积为80 μL的反应液。
向吸附柱中直接加入80 μL DNase I 混合液，20-30℃孵育15分钟。
向吸附柱中加入350 μL Buffer RW1，12,000 rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
向吸附柱中加入500 μL Buffer RW2（使用前检查是否加入无水乙醇）, 12,000 rpm离心1分钟,弃废液。
重复步骤9。
将吸附柱放回收集管中，12,000 rpm离心2分钟。

注意：这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。

将吸附柱装入新的RNase-Free的收集管中，向吸附膜的中间加入30-50 μL RNase-Free Water，室温放置1分钟，12,000 rpm离心1分钟，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。

注意：1）RNase-Free Water体积不应小于30 μL，体积过小影响回收率。

2）如果要提高RNA的产量，可用30-50 μL新的RNase-Free Water重复步骤12。

3）如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤12

注意事项：