柱式法提取全血 miRNA 试剂盒
货号：M03270
规格：25T/50T/100T
保存：室温(15℃-25℃)干燥保存， 有效期 1 年。
试剂盒组成 | 25T | 50T | 100T |
裂解液 A | 3ml | 6ml | 12ml |
裂解液 B | 4.5ml | 9ml | 18ml |
漂洗液 1 | 14.85ml | 29.7ml | 59.4ml |
漂洗液 2 | 3.75ml | 7.5ml | 15ml |
RNase-free dd H2O | 1ml | 2ml | 4ml |
吸附柱 | 25 | 50 | 100 |
2ml 收集管 | 25 | 50 | 100 |
说明书 | 1 份 | 1 份 | 1 份 |
注意：使用前请先在漂洗液 1 中加入β-巯基乙醇 (25T 加 150ul，50T 加 300ul ， 100T 加 600ul) ，漂洗液 2 中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。 需自备无水乙醇、 95% 乙醇和 β-巯基乙醇。
产品简介：
本试剂盒采用独特的裂解液迅速裂解全血(新鲜的抗凝全血样本) 分离 miRNA 和其他物质，经一系列快速的漂洗-离心即可获得高纯度 miRNA。提取 的 miRNA 不含大 RNA 和 DNA，可适用于 RT-qPCR 等多种下游实验。本试剂盒使用一步上柱，操作简单，用时短。
特点:
1. 完全无毒，无需酚氯仿等有机试剂抽提。
2. 适用范围广，可用于多种样品 microRNA 及总 RNA 的抽提纯化。
3. 操作简单快速，整个过程 30 分钟左右完成。
4. 纯度好，得率高，可以直接用于各种下游实验。
操作步骤：
1. 在 1.5mL 离心管中依次加入 100μL 裂解液 A 、150μL 裂解液 B 、4.5μLβ-巯基 乙醇和 200μL 血液，涡旋震荡 5s，室温静置 3min。
2. 向上述裂解完毕的液体中加入 200μL 无水乙醇，涡旋震荡 20s，室温静置 3min。
3. 4℃ ，12000rpm 离心 3min。
4. 缓慢转移 400μL 上清液至新的1.5mL 离心管，加入 400μL 95%乙醇，涡旋震荡5s。
5. 将上述混合物一次性加入吸附柱(吸附柱放在收集管中)，12000rpm 离心 1min，弃滤液。
6. 加入 300μL 漂洗液 1 ，12000rpm 离心 1min ，弃滤液。
7. 重复一遍 6。
8. 加入 300μL 漂洗液 2 ，12000rpm 离心 1min ，弃滤液。
9. 重复一遍 8。
10.将吸附柱放入空的收集管中，12000rpm 离心 2min，弃掉收集管，吸附柱开盖放置 2min ，以除去残留乙醇。
11.将吸附柱放入新的 1.5mL 离心管中， 向吸附柱中央加入 25μL RNase-free ddH2O，室温放置 2min ，4℃ ，12000rpm 离心 2min，得到 miRNA 溶液。
注意事项：
1. 所有相关器皿耗材都应为RNase-free 产品，操作过程要小心，带口罩、手套避免环境中 RNA 酶污染样品。
2. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
3. 尽量使用新鲜的血液进行 miRNA 提取。
4. 漂洗液 1 在 4℃放置一段时间会有结晶析出， 此时需加热溶解降至室温后再使 用。
提取的 miRNAs 可以用于特异性引物的检测：
采用本试剂盒提取的 miRNA 质量进行检测，样品包括动物全血、血清、血浆， 为了进一步检测 本试剂盒提取的 miRNA 是否可以特异性的应用于荧光定量 PCR，设计了针对鼠血的 U6 通用引 物进行验证，通过荧光定量 PCR 分析发现，其溶解曲线比较整齐， 说明是引物特异性扩增；且 其融解曲线特异性好并且 CT 值接近，说明本方法能够取得 miRNA 可以稳定应用于特异性引物 的荧光定量 PCR 检测。