柱式法提取植物 miRNA 试剂盒
货号：M03280
规格：50T/100T
保存：室温(15℃-25℃)干燥保存， 有效期 1 年。
试剂盒组成 | 50T | 100T |
裂解液 | 35mL | 70mL |
漂洗液 | 15mL | 30mL |
RNase-free ddH2O | 2mL | 4mL |
吸附柱 | 100 | 200 |
2mL 收集管 | 100 | 200 |
说明书 | 1 份 | 1 份 |
注意：使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。 另需自备氯仿。
产品简介：
本试剂盒采用独特裂解液替代传统 Trizol，可以从植物组织中快速提取 miRNA，且提取到的 miRNA 纯度和浓度均高，没有其他杂质污染，可用于RT-qPCR 等多种下游实验。
操作步骤：
1. 在 1.5mL 离心管中加入 500μL 裂解液，液氮中研磨适量新鲜植物组织成细粉 后，取 50- 100mg 细粉转入上述装有裂解液的离心管中，涡旋震荡 15s，室温静 置 5min。
2. 向上述裂解完毕的液体中加入 100μL 氯仿，涡旋震荡30s，室温静置 5min。
3. 4℃ ，12000rpm 离心 10min。
4. 量取上清液体积， 缓慢转移至新的 1.5mL 离心管， 然后向其中加入 0.45 倍上 清液体积的无水乙醇(如： 400μL 上清液加 180μL 无水乙醇)，涡旋震荡 5s。
5. 将上述混合物一次性加入吸附柱(吸附柱放在收集管中)，12000rpm 离心 2min， 收集滤液。
6. 量取滤液体积， 缓慢转移至新的 1.5mL 离心管， 然后向其中加入 0.65 倍滤液 体积的无水乙醇(如： 500μL 滤液加325μL 无水乙醇)，涡旋震荡 5s。
7. 将上述混合物一次性或分两次加入新的吸附柱 (吸附柱放在收集管中) ， 12000rpm 离心 2min ，弃滤液。
注： 若滤液体积不超过 500μL，混合物可一次性加入吸附柱， 反之则需分两次加 入。
8. 吸附柱重新放回收集管中， 然后向吸附柱中加入 600μL 漂洗液， 12000rpm 离
心 1min ，弃滤液。
9. 重复一遍 8。
10.将上一步吸附柱放回收集管中， 12000rpm 离心 2min，弃掉收集管， 吸附柱开 盖放置 2min ，以除去残留乙醇。
11.将吸附柱放入新的 1.5mL 离心管中， 向吸附柱中央加入 30μL RNase-free ddH2O，室温放置 5min ，4℃ ，12000rpm 离心 2min，得到 miRNA 溶液。
注意事项：
1. 所有相关器皿耗材都应为 RNase-free 产品， 操作过程要小心，带口罩、手套 避免环境中 RNA 酶污染样品。
2. 避免试剂长时间暴露于空气中，产生挥发、氧化、 pH 值变化， 各溶液使用后应及时盖紧盖子。
3. 尽量使用新鲜植物组织提取 miRNA。
提取的 miRNAs 可以用于特异性引物的检测：
采用本试剂盒提取的 miRNA 质量进行检测，样品包括植物根茎叶等组织， 为了进一步检测本试 剂盒提取的 miRNA 是否可以特异性的应用于荧光定量 PCR，设计了针对绿萝和吊兰叶片的 U6 通用引物进行验证，通过荧光定量 PCR 分析发现，其溶解曲线比较整齐，说明是引物特异性扩 增；且其融解曲线特异性好并且不同样品的 CT 值接近，说明本方法能够取得 miRNA 可以稳定 应用于特异性引物的荧光定量 PCR 检测。