柱式超纯多糖多酚植物 RNA 小提试剂盒

柱式超纯多糖多酚植物 RNA 提取试剂盒说明书

货号:M03330

规格:50T

保存条件: DNase I及10×Reaction Buffer -20℃保存， 其它组分室温(15-30℃)。

产品内容

产品简介

本试剂盒适用于从多种植物中提取RNA，即便是从多糖多酚含量丰富的植物中也能成功提取高质量的RNA，如水稻叶片、小麦叶片、玉米叶片、烟草叶、松针、银杏叶、杨树叶、石榴叶、冬青叶、苹果、桃、梨、西红柿、樱桃、杏、香蕉、葡萄、枇 杷、桂圆果皮、桂圆果肉、荔枝果皮、荔枝果肉、大豆、花生、玉米、马铃薯块茎、 月季花瓣、石榴花瓣，香菇、平菇等样本。独特的裂解液配方，可使细胞中的RNA酶 迅速灭活，有效去除多糖多酚对RNA提取的影响，无需苯酚、氯仿等试剂，同时采用 硅基质膜吸附RNA进行纯化，提取的总RNA纯度高，无基因组、蛋白质和其它杂质的 污染,可用于Real Time RT-PCR、RT-PCR 、Northern Blot、Dot Blot、和体外翻译等 多种下游实验。

RNA得率

自备试剂： β-巯基乙醇、无水乙醇(新开封或提取RNA专用)

实验前准备及重要注意事项

1 ．预防RNase污染，应注意以下几方面：

1. 使用无RNase的塑料制品和枪头。

2)操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。

2．提取的样品避免反复冻融，否则影响RNA提取得率和质量。

3 ．Buffer RLS如果产生沉淀，请加热使其溶解后室温放置。

4 ．Buffer RLS在使用前请加入β-巯基乙醇， 1 ml Buffer RLS加20μL β-巯基乙醇。加入 β-巯基乙醇的Buffer RLS室温可保存1个月。

1. 第一次使用Buffer RW2前应按照试剂瓶标签的说明加入无水乙醇。

操作步骤

1 ．匀浆处理：取50-100mg植物组织在液氮中迅速研磨成粉末，加入500 μl Buffer RLS (使用前请先检查是否加入β-巯基乙醇)，立即涡旋剧烈震荡混匀。

注意：对于含水量极其丰富的材料，如西瓜果肉，西红柿，梨果肉等，可以适当多加入些材料，最多可增加至200mg；对于富含淀粉的样本或成熟叶片，可适当增加Buffer RLS的用量，最多可增加至700μl。

2 ．4°C 12,000 rpm (~13,400×g)离心2分钟。

3 ．将上清液转入已装入收集管的过滤柱(Spin Columns FS)中， 4°C 12,000 rpm离心1分钟，小心吸取收集管中的上清并转移至新的RNase-Free 离心管(自备)中， 枪头尽量避免接触收集管中的细胞碎片沉淀。

4 ．缓慢加入0.5倍上清体积的无水乙醇，混匀(此时可能会出现沉淀)，将得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱(Spin Columns RM)中，若一次不能将 全部溶液加入吸附柱中，请分两次转入。 4°C 12,000 rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。

5 ．向吸附柱RM中加入350 μl Buffer RW1，4°C 12,000 rpm离心1分钟，弃废液，将吸 附柱重新放回收集管中。

6 ．配制DNase I 混合液：取52 μl RNase-Free Water，向其中加入8 μl 10×Reaction Buffer和20 μl DNase I ( 1 U/μl ) ，混匀，配制成终体积为80 μl的反应液。

7．向吸附柱中直接加入80 µl DNase I 混合液，20-30℃孵育15分钟。

8 ．向吸附柱RM中加入350 μl Buffer RW1，4°C 12,000 rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。

9 ．向吸附柱RM中加入500μl Buffer RW2 (使用前检查是否加入无水乙醇) , 4°C 12,000 rpm 离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。

10．重复步骤9。

11 ．4°C 12,000 rpm离心2分钟。

注意：这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续的酶促反应(酶切、 PCR等)。

12．将吸附柱RM装入新的RNase-Free Centrifuge Tubes (1.5 ml)中，向吸附膜的中间部位悬空滴加30-50 μl RNase-Free Water，室温放置2分钟，4°C 12,000 rpm离心1分钟，得到的RNA溶液保存在-70℃，防止降解。

注意：

1 ) RNase-Free Water体积不应小于30 μl ，体积过小影响回收率。

2) 如果要提高RNA的产量，可用30-50 μl新的RNase-Free Water重复步骤12。

3) 如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤12。