细菌基因组 DNA 提取试剂盒 (磁珠法) 说明书
货号：M03500
规格： 50T/ 100T
保存：
2-8℃(注:RNaseA 以附件形式，-20℃保存;蛋白酶K、磁珠，4℃保存，请勿冷冻）
试剂盒组成：
组分 | 50 T | 100 T |
裂解液 | 10 mL | 20 mL |
结合液 | 15 mL | 30 mL |
漂洗液1 | 30 mL | 60 mL |
漂洗液2 | 7.5 mL | 15 mL |
蛋白酶K | 20mg×1 | 20mg×2 |
溶酶液 | 1 mL×1 | 1 mL×2 |
RNase A | 100 μL×1 | 100 μL×2 |
洗脱液 | 100 mL | 10 mL |
磁珠 | 1 mL | 1 mL |
说明书 | 1 份 | 1 份 |
产品简介：
磁珠法提细菌基因组DNA剂盒，使细菌在裂解液中裂解完全后，在结合液的作用下促进基因组DNA与磁珠特异性地识别和高效的结合，经漂洗液漂洗后可最大限度去除杂质蛋白及其它有机化合物，在外加磁场力的作用下能从样品中分离出DNA。提取的基因组DNA纯度高A260/A280比率介于1.8-2.0之间，可以应用到各类分子生物学下游实验。适用于革兰氏阴性菌。
产品特点：
磁珠法提取细菌基因组DNA具有传统柱式法无法比拟的优势。与柱式法相比大大缩短了实验时间且提取到高质量的细菌基因组DNA可以应用到各类分子生物学下游实验。具有操作简单，用时短，安全无毒，可完成自动化提取等优势。
操作步骤 (仅供参考) ：
使用前请先在漂洗液加入异丙醇/无水乙醇，加入试剂体积请参照瓶体上的标签。(50T/100T的漂洗液1 需单独加入 30mL/60mL 的异丙醇，50T/100T 漂洗液2需单独加入 22.5mL/45mL的无水乙醇)。蛋白酶 K 溶液配置: 取 1mL溶酶液加入到 20mg 蛋白酶K 粉末中,配成 20mg/mL 的蛋白酶 K 溶液，配好的蛋白酶溶液-20°C保存。
- 于 EP 管中加入菌液 1-3mL，12000 rpm 离心1min，尽量吸除上清。
2.向菌体中加入 200 μL裂解液，涡旋震荡或用移液枪反复吹吸菌体，使菌体充分悬浮。加入 20μL 蛋白酶 K，充分颠倒混匀，于 60℃水浴锅中消化 10-20 min，菌液呈现清亮粘稠即消化完全。
3.将 EP 管从水浴锅中取出，待温度降至室温后加入 2 μL RNaseA，移液枪吹吸混匀，室温静置 15min。
4.加入等体积结合液，用移液枪吹吸混匀，于 60℃水浴锅中水浴 10 min。
5.将 EP 管从水浴锅中取出，待温度降至室温后加入 20 μL磁珠，涡旋震荡混匀，室温静置 10 min。将 EP 管置于磁力架中进行磁分离，待磁珠完全吸附于磁力架后，用移液枪沿管壁尽量将液体吸除干净，注意不要吸到磁珠。
6.加入 500 μL 的漂洗液 1(使用前加入异丙醇)，用涡旋振荡器震荡混匀。将离心管放置于磁力架中，待磁珠完全吸附于磁力架后，用移液枪沿管壁尽量将液体吸除干净，注意不要吸到磁珠。
7.重复第 6 步操作。
8.加入 500 μL 的漂洗液 2(加无水乙醇后使用)，用涡旋振荡器震荡混匀。将离心管放置于磁力架中，待磁珠完全吸附于磁力架后，用移液枪沿管壁尽量将液体吸除干净，注意不要吸到磁珠。
9.打开离心管的盖子，于室温中静置干燥5分钟，观察离心管壁和底部液体挥发完全且磁珠表面呈光滑的亮面即可，注意干燥时间不能太久，会使得磁珠不易被洗脱。
10.加洗脱液 50-100 μL ，涡旋混匀，56℃孵育5 min 后将离心管置于磁力架中，待磁珠完全吸附于磁力架后，用移液枪沿管壁将溶液吸到新的离心管中,注意不要吸到磁珠,所得溶液即为纯化后的基因组 DNA 样品,放于-20℃保存。
注意事项：
1.磁珠使用前用涡旋震荡器震荡混匀。
2.磁珠置于 4℃冰箱保存。
3.冷冻，干燥和离心等操作会引起磁珠团聚，不易于重悬和分散，并影响磁珠表面功能基团的化学活性。
4.样品应避免反复冻融，否则会导致提取量下降。