动物DNA/RNA病毒基因组提取试剂盒 (带附件：蛋白酶K 1.5m1×1支 )

动物DNA/RNA病毒基因组提取试剂盒

货号：M03520

规格：50T/100T

保存：室温（15℃-25℃）干燥条件下可保存12个月，更长时间的保存可置于2℃-8℃。裂解液需-20℃保存。

产品内容：

产品简介：

本试剂盒既适合从血清、细胞上清、淋巴液中提取DNA/RNA病毒基因组，同时也适合从动物组织匀浆液中快速提取高纯度的病毒基因组。试剂盒提取过程中无需使用有毒的酚氯仿抽提，也无需进行耗时的醇类沉淀，获得的核酸可直接用于PCR/RT-PCR、Sorthern杂交/Northern杂交、以及LAMP/RT-LAMP等系列下游实验。

操作步骤：

使用前请先在漂洗液中加入65mL新开启的无水乙醇，盖好摇匀。所有离心步骤均在2-8℃条件下进行。

（一）从血清、细胞上清、淋巴液中提取DNA/RNA病毒基因组

1. 取病毒上清液0.5mL，12000rpm离心5min，尽量吸尽上清使用，弃去沉淀（如无沉淀可省去此步）。
2. 向病毒上清中加入30μL 10mg/ml的裂解液，充分混匀，65℃消化10min，期间可颠倒离心管混匀数次。
3. 吸附柱前处理：从包装中取出吸附柱，放入收集管中，加入700μL 洗柱液，室温放置2分钟，2-8℃ 12000 rpm离心2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中待用。
4. 向病毒上清中加入500μL结合液，充分混匀。再向管中加入400μL无水乙醇，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响RNA的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中，静置2min。（吸附柱的最大容积为750μL，可分两次加入。一次吸附完离心后再将余下的混合液体加入柱中静置离心。）
5. 12000rpm离心2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
6. 向吸附柱中加入700μL 漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
7. 向吸附柱中加入500μL漂洗液，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
8. 12000rpm离心2min，将吸附柱置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。
9. 将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加50μL-100μL经65℃水浴预热的RNase free ddH₂O，室温放置5min，12000rpm离心2min。即可得高质量的病毒基因组。

（二）从动物组织匀浆液中提取DNA/RNA病毒基因组

1. 取适量待检新鲜样品组织加入1~5倍体积的生理盐水进行匀浆。
2. 向0.5mL匀浆液中加入30μL10mg/ml的裂解液，充分混匀，65℃消化10min，期间可颠倒离心管混匀数次，12000 rpm离心3 min，取上清。
3. 吸附柱前处理：从包装中取出吸附柱，放入收集管中，加入700μL 洗柱液，室温放置2分钟，2-8℃ 12000 rpm离心2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中待用。
4. 向匀浆上清中加入500μL结合液，充分混匀。再向管中加入400μL无水乙醇，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响RNA的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中，静置2min。（吸附柱的最大容积为750μL，可分两次加入。一次吸附完离心后再将余下的混合液体加入柱中静置离心。）
5. 12000rpm离心2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
6. 向吸附柱中加入700μL漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
7. 向吸附柱中加入500μL漂洗液，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
8. 12000rpm离心2min，将吸附柱置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。
9. 将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加50μL-100μL经65℃水浴预热的RNase free ddH₂O，室温放置5min，12000rpm离心2min。即可得高质量的病毒基因组。

注意事项：

1. 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。
2. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的RNA提取量也下降。
3. 若结合液中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解。
4. 如果样品消化不彻底，后面的离心步骤中可能会出现堵柱子的情况，可适当延长离心时间。
5. 洗脱缓冲液的体积最好不少于50μL，体积过小会影响回收效率。
6. RNA产物应保存在-70℃，以防RNA降解。
7. RNA检测：得到的基因组RNA片段的大小与病毒的保存条件和种类等因素有关。由于病毒不含有核糖体RNA，所以常规电泳无法检测，只有后期实验才可检测到。D260值为1相当于大约40μg/ml单链RNA。