动物组织/细胞总蛋白提取试剂盒 (柱式法 )

动物组织/细胞总蛋白提取试剂盒（柱式法）

货号：M03540

规格：50T

保存：RT，有效期1年。

应用：可用于动物细胞和组织的总蛋白样品制备，适用于SDS-PAGE,WB等下游应用

产品组成：

产品说明：

动物细胞/组织总蛋白提取试剂盒，是新一代超快速蛋白质提取工具。越来越多的证据表明最常用的RIPA缓冲液可能导致蛋白质的随机损失，产生很多难以解释的疑难数据。本试剂盒使用离心管柱提取技术结合优化的裂解缓冲液可以更快速、更有效地提取总蛋白，使WB结果更加准确。使用离心管柱提取蛋白，提取体系最低可以低至20μL，有效的解决了小样本量的样本。

操作方法（仅供参考）：

1. 细胞样品总蛋白提取：
2. 非贴壁细胞
3. 将离心管柱及接收管套管放在冰上预冷。
4. 低速离心收集细胞，在1.5mL离心管中加入预冷的PBS，涡旋震荡，500×g离心2-3分钟清洗细胞。吸去上清，剩余与细胞体积相同体积的PBS。涡旋震荡重悬细胞。
5. 加入表格1中相应体积的细胞裂解液，涡旋震荡裂解细胞。（细胞数量和裂解液须保证对应关系，以达到最佳提取效率）

注：部分未完全裂解的细胞不会影响样品质量。

1. 将裂解的细胞转移到预冷的离心管柱套管中，14000-16000×g离心30秒取出。
2. 立刻将收集管放置于冰上，弃去离心管柱，蛋白提取完成可应用于下游实验。

表1. 不同细胞体积应加入相应体积裂解液

1. 贴壁细胞
2. 将离心管柱及接收管套管放在冰上预冷
3. 将预冷的PBS直接加入培养板，培养皿或培养瓶中清洗贴壁细胞，吸去上清。
4. 按照表2中将相应体积的细胞裂解液均匀的加入整个器皿表面，用移液器吹打几次，将裂解的细胞转移到预冷的离心管柱套管中，14000-16000×g离心30秒取出。（如提取浓度不佳，可减少裂解液使用量）
5. 立刻将收集管放置于冰上，弃去离心管柱，蛋白提取完成可应用于下游实验。

表格2. 不同贴壁细胞量应加入相应体积裂解液

1. 动物组织总蛋白提取：

以下步骤是从15-20mg组织中提取。如果起始量较大或者较小，需调整相应裂解液的用量比例。

1. 将离心管柱及接收管套管放在冰上预冷。
2. 取15-20mg组织放置于洁净EP管中，用塑料研磨棒扭转研磨50-60次，加入200μL细胞裂解液，继续研磨30-60次，密封室温孵育1-2分钟后得到组织裂解混合物。（组织用量不要过量，无需过度研磨，裂解液可分两次加入以得到最佳效果）

注：塑料研磨棒可以重复使用，用蒸馏水彻底冲洗干净，用纸巾擦干。

1. 吸取全部组织裂解混合物放入离心管柱中，插入接收管，14000-16000×g离心1-2分钟取出。收集管里的上清是抽提的变性总蛋白。

注：部分未完全裂解的组织不会影响样品质量。

注意事项：

1. 蛋白酶抑制剂不是必须加入，但是如果下游实验需要较长时间或者蛋白提取后保存较长时间，建议添加蛋白酶抑制剂。推荐使用BCA试剂盒用于蛋白浓度测定。研究蛋白磷酸化，磷酸酶抑制剂应在使用前加入裂解缓冲液。
2. 做WB上样前，仍需和Loading buffer混匀煮制样品。

常见问题：