DNA病毒基因组提取试剂盒 (带附件：蛋白酶K 1m1×1支 )

DNA病毒基因组提取试剂盒

货号：M03610

规格：50T/ 100T

保存：室温(15℃-25℃) 干燥保存，复检期12个月，2℃-8℃保存时间更长。裂解液存放于-20℃。

试剂盒组成：

产品简介：

本试剂盒仅适合于从血清、细胞上清、淋巴液中提取DNA病毒基因组，不适合于RNA病毒基因组的提取。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

操作步骤（仅供参考）：

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1、 取病毒上清液0.5mL，12000rpm离心5min，尽量吸尽上清使用，弃去沉淀。

2、 向病毒上清中加入20μL的裂解液（10mg/ml），充分混匀，65℃消化10-20min，期间可颠倒离心管混匀数次。

3、 向管中加入500μL溶液V，充分混匀。再向管中加入400μL无水乙醇，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响DNA的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中，静置2min。（吸附柱的最大容积为750μL，可分两次加入。一次吸附完离心后再将余下的混合液体加入柱中静置离心。）

4、 12000rpm离心2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

5、 向吸附柱中加入600μL漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

6、 向吸附柱中加入600μL漂洗液，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

7、 12000rpm离心2min，将吸附柱置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除， 否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。

8、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加50μL-100μL经65℃水浴预热的洗脱液，室温放置5min，12000rpm离心1min。

9、离心所得洗脱液再加入吸附柱中，室温放置2min，12000rpm离心2min，即可得到高质量的病毒基因组DNA。

注意事项：

1. 裂解液需放置-20℃保存。
2. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
3. 若溶液V中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解再使用，不影响效果。
4. 洗脱缓冲液的体积最好不少于50μL，体积过小会影响回收效率。洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)，pH 值低于7.0会降低洗脱效率。DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。
5. DNA浓度及纯度检测：得到的基因组DNA片段的大小与病毒的保存条件和种类等因素有关。D260值为1.0相当于大约50ug/ml双链DNA、40ug/ml单链DNA。OD260/OD280比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。
6. 如果病毒含量过低，最后提取的基因组DNA电泳可能无法检测到，但PCR等其他实验还会有结果。