全血基因组 DNA 提取试剂盒 (磁珠法) 说明书
货号：M03630
规格： 50T/ 100T
保存：
2-8℃(注:RNaseA 以附件形式，-20℃保存;蛋白酶K、磁珠，4℃保存，请勿冷冻）
试剂盒组成：
组分 | 50 T | 100 T |
裂解液结合液 | 25 mL | 50 mL |
洗脱液 | 15 mL | 30 mL |
洗涤液1 | 15 mL | 30 mL |
洗涤液2 | 8 mL | 16 mL |
蛋白酶K | 20mg×1 | 20mg×2 |
溶酶液 | 1 mL×1 | 1 mL×2 |
RNase A | 100 μL×1 | 100 μL×2 |
磁珠 | 0.5 mL | 1 mL |
说明书 | 1 份 | 1 份 |
产品简介：
适用于从抗凝处理的全血样品中快速、高效地提取基因组DNA。提取过程采用超顺磁性微球，无需离心操作；使用预制的缓冲液，可直接进行提取，无需预先去除红细胞。本产品既可以手动进行少量样品的提取，也适合于用自动化工作站进行高通量操作。提取的产物可用于酶切、PCR扩增、检测等后续实验。
准备工作:
漩涡振荡器、旋转混合仪恒温水浴锅/金属浴:55℃、磁性分离器。
操作步骤 (仅供参考) ：
使用前请先在洗涤液加入异丙醇/无水乙醇，加入试剂体积请参照瓶体上的标签。(50T/100T的洗涤液1 需单独加入 15mL/30mL 的异丙醇，50T/100T 洗涤液2需单独加入 20mL/48mL的无水乙醇)。蛋白酶 K 溶液配置: 取 1mL溶酶液加入到 20mg 蛋白酶K 粉末中,配成 20mg/mL 的蛋白酶 K 溶液，配好的蛋白酶溶液-20°C保存。
1、取一个新的 1.5mL 离心管,加入 200 μL 的抗凝血液样品(不足 200 μL 时可用 PBS 或洗脱液补足)，再分别加入 20 μL 蛋白酶K、2μL RNase A 和 500uL的裂解液，以涡旋振荡器最大转速漩涡震荡 10s后，置于 60°C水浴 5min。
2、加入 450 μL异丙醇和 10μL 的磁珠(磁珠使用前需完全展荡混匀)，以涡旋振荡器最大转速漩涡震荡 10min(或漩涡震荡 10s 后置于混匀仪上反应 10min)。然后将离心管置于磁性分离器上放置2min，用移液器移去上清液并取下离心管。注:此步骤的磁性分离时间应不少于 2min。
3、加入 600 μL洗涤液1(检査是否已加入异丙醇)，漩涡震荡 30s 或用移液器缓慢吹打磁珠 20 次使磁珠充分重悬，再将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清,用移液器移去上清液并取下离心管重复该步骤一次。
4、加入 600μL, 洗涤液2(检査是否已加入无水乙醇)，漩涡震荡 30s 或用移液器缓慢吹打磁珠 20次，使磁珠充分重悬，再于室温下静置 1min 后，将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清，用移液器移去上清液。注:此步骤应尽量除尽洗涤液。
5、保持离心管于磁性分离器上，于室温下静置 10min 后，取下离心管,静置期间如果离心管底部有多余的液体，用移液枪将其吸出。
6、将离心管从磁力架上取下，置于普通离心管架上，加入 100-200 μL洗脱液，用移液器缓慢吹打磁珠 50 次，使磁珠充分重悬。然后室温孵育 5min，将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清，转移上清液至新的离心管中，此即为纯化得到的基因组 DNA，可保存于-20℃。
注意事项：
1.操作之前，请务必认真阅读本说明书。
2.血液样品的质量对产物 DNA 的纯化量有较大影响，应避免反复冻融血液样品。
3.应避免对磁珠进行冷冻、离心等操作。
4.磁珠取用前应充分重悬均匀。
5.磁珠干燥前，应使用移液器吸尽洗涤液。
6.应避免磁珠过度干燥，否则会严重降低核酸洗脱效率。
7.建议使用质量较好的离心管和移液器吸头，避免因粘附磁珠而造成损失
8.在 96 孔板中进行磁性分离操作时，磁珠吸附时间可适当延长至 4~5min。