土壤基因组DNA提取试剂盒

土壤基因组DNA提取试剂盒

货号：M03690

规格：50T/ 100T

保存：室温(15℃-25℃) 干燥保存，复检期12个月，2℃-8℃保存时间更长。

注：试剂盒开封后溶液A、B、C、D需在2-8℃保存。PCR增强剂-20℃保存。

产品简介：

本试剂盒适合于从褐土、淤泥、火山灰等各种极端土壤环境中提取微生物DNA。对土壤中各种细菌、真菌有很好裂解效果，最大限度的保留了微生物DNA的多态性。

本试剂盒采用我公司特有的腐殖质吸附材料，可高效专一的去除各种腐殖质成分而丝毫不会影响DNA的产率，纯度较酚、氯仿抽提法提高数倍。

使用本试剂盒提取的DNA产量大、完整性好，可直接用于各种常规操作，包括酶切、PCR 、文库构建、Southern 杂交等实验。

操作步骤：

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。 1、液氮研磨

① 称取土壤样本0.1-0.5g，在液氮中充分研磨成细粉末，加入450μL 溶液A 震荡混匀。

②加入50μL溶液B充分颠倒混匀 (不要剧烈震荡)，65℃水浴6min，每2min充分颠倒混匀一次。

2、（可选）玻璃珠研磨

①直接称取样本0.1-0.5g于2mL离心管(建议样本用量为0.25g)，加入450μL溶液A和0.25g玻璃珠，涡旋混匀15 sec。

②向样本中加入50μL溶液B，涡旋振荡10 min至样本混匀。

③12,000 rpm（~13,400×g）离心1 min。转移上清液至新的2 ml离心管。

3、加入100μL溶液C充分颠倒混匀 (不要剧烈震荡)，12000rpm离心10min。

4、将上清转移到新的离心管，12000rpm离心2min。

5、在吸附柱中加入200μL溶液D，将离心后的上清加入到带有溶液D 的吸附柱中，用移液器吹吸几次混匀，12000rpm离心1min。

6、将收集管中的滤出液混匀后重新吸入吸附柱( 必须)，12000rpm离心1min。

7、倒掉收集管中的废液，在吸附柱中加入漂洗液500μL，12000rpm离心1min。

8、倒掉收集管中的废液，重复步骤7 两次(共漂洗三次)。

9、倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管，12000rpm离心2min。

10、拿出吸附柱在室温干燥数分钟( 因季节及气候等因素不等)，或50℃干燥1min。

11、将吸附柱放入一个新的离心管中，加入50-100μL 洗脱液(65 ℃预热)，12000rpm离心1min。

12、将离心管中的液体重新加入到吸附柱中，12000rpm离心1min。离心管中即为土壤微生物DNA 溶液。

13、若产物PCR效果差，可以适当稀释DNA产物，或添加1/10体积的PCR增强剂。

注意事项：

1. 新鲜的土壤样本会得到更高的产率，不同样本在采样前应先查阅相应的最佳保存条件。
2. 若溶液中出现浑浊可在37℃水浴中溶解片刻至清澈，不会影响结果。
3. 在需要吸取上清液的步骤中应避免吸到沉淀，否则会堵塞吸附柱，并影响产物纯度。
4. 洗脱缓冲液的体积最好不少于50μL，体积过小会影响回收效率；建议使用试剂盒附带的洗脱缓冲液，用水洗脱也会损失部分产物；DNA应保存在-20 ℃避免反复冻融，以防降解。
5. 若产物含有腐殖质残余则会严重影响DNA的光吸收值，应采取电泳检测和分光光度计检测相结合的方式鉴定。
6. 液体试剂避免接触皮肤，若意外接触应立即使用大量清水冲洗。