快速去基因组逆转录预混液说明书
货号：M03760
规格：10T/100T
英文名称：HiFiScript gDNA Removal RT MasterMix
保存：-20℃，1年
产品内容：
Component | 10 T | 100 T |
10×gDNA Remover Mix | 10 µl | 100 µl |
5×HiFiScript RT MasterMix | 40 µl | 400 µl |
RNase-Free Water | 0.5 ml | 1.5 ml |
产品说明（仅供参考）:
该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
本产品是用于去除基因组DNA进行逆转录的试剂盒，在42℃, 2分钟即可除去基因 组DNA。同时，逆转录试剂中含有抑制gDNA Remover的组分，经过gDNA Remover 处理后的样品可以直接进行逆转录反应合成cDNA。
本试剂盒配有新型高效反转录酶HiFiScript，新颖突变位点大幅提升酶的转录活 性。同时，逆转录反应只需15分钟即可完成cDNA第一链的合成 。5 × HifiScript RT MasterMix为逆转录预混液，包含逆转录所需全部试剂，操作方便快捷。
产品特点
1 ．快速去除基因组：含有去除基因组DNA的gDNA Remover，只需2分钟即可除去基 因组DNA。
2 ．快速逆转录：15分钟即可完成cDNA第一链合成。
3 ．方便快捷：即用型逆转录Mix，操作简便。
4 ．灵敏度高：可利用pg级总RNA或mRNA模板合成cDNA第一链。
5 ．高效的逆转录效率：新颖突变位点大幅提升酶活性能，获得更高产量的cDNA。
注意事项
1 ．在操作过程中应避免RNase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染，建议操作人 员带口罩和一次性手套并经常更换手套，使用专门的仪器和耗材。
2 ．实验尽量使用一次性塑料器皿，若使用玻璃器皿，应使用0.1％DEPC（焦碳酸二乙 酯）水溶液在37℃处理12小时，并在120℃下高压灭菌30分钟后使用，或者将玻璃 器皿在180℃下干热灭菌60分钟后使用。实验中用到的无菌水应使用0.1%的DEPC 处理后进行高压灭菌。
3 ．逆转录体系配制在冰上进行操作，防止RNA发生降解。试剂盒的酶使用后尽快置于 -20 ºC保存，并尽量避免反复冻融。
使用方法
将模板RNA在冰上解冻；试剂盒组分在室温解冻后立刻置于冰上。使用前将每种溶液涡旋振荡混匀，并经短暂离心后使用。
一、去除基因组DNA反应
1 ．根据以下表格在冰上配制反应体系，总体积为10 μl。为了保证反应液配制的准确 性， 先按反应数+2的量配制预混体系， 然后再分装到每个反应管中， 最后加入 RNA样品。
试剂 | 10 μl反应体系 |
10×gDNA Remover Mix | 1µl |
RNA Template1 | 10 pg-1 μg |
RNase-Free Water | up to 10 µl |
注意：1） 如果总RNA量大于1 µg，请按比例扩大反应体系。
2 ．涡旋震荡混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
3 ．42℃孵育2分钟（室温反应时，可以延长到30分钟）。
4 ．反应结束后，短暂离心，置于冰上冷却。
二、逆转录反应
1 ．根据以下表格在冰上配制反应体系，反应液配制请在冰上进行。为了保证反应液配置的准确性，先按反应数+2的量配制成预混溶液，然后再分装10 μl到每个反应管中，取配制的预混液10 μl加入至已完成去基因组的步骤1反应管中。
试剂 | 20 μl反应体系 |
步骤1反应液 | 10 µl |
5×HiFiScript RTMaster Mix | 4 μl |
RNase-Free Water | 6 μl |
2．混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
3．cDNA合成反应条件：37℃孵育15分钟，85℃孵育5秒钟。
4．反应结束后，短暂离心后置于冰上，再进行后续反应，如果需要长时间保存，请置于-20℃。