磁珠法大体积游离DNA提取试剂盒说明书
货号: M03800
规格：48T
英文名称：Magbead Free-Circulating DNA Maxi Kit
保存：Magbeads ZN 2-8℃，其余组分室温（15-30℃）
产品内容
Component | 2 mL×48 preps |
Buffer MPL | 120 mL |
20% SDS | 6 mL |
Buffer GW1（concentrate） | 80 mL |
Buffer GCW2（concentrate） | 40 mL |
RNase-Free Water | 30 mL |
Proteinase K | 2×1.25 mL |
Magbeads ZN | 2×1 mL |
产品简介
该试剂盒适用于从血浆、血清、羊水等无细胞体液中纯化回收游离DNA（Free-circulating/Cell-free DNA）。高盐时，游离DNA结合于硅基包被的磁珠表面。漂洗后，游离DNA洗脱于RNase-Free Water 中。游离DNA的得率与样品类型、储存条件、时间以及个体间差异有很大关系。纯化得到的游离DNA质量稳定、可靠，可用于定量PCR、产前诊断等下游实验。
自备仪器、试剂
康为CWE240全自动核酸提取仪
无水乙醇、异丙醇（北京化工厂）
24 DW Plate and Tips Pack for CWE240（货号：CW3066）
实验前准备及重要注意事项
1、第一次使用前应按试剂瓶标签说明先在Buffer GW1中加入无水乙醇。
2、第一次使用前应按试剂瓶标签说明先在Buffer GCW2中加入无水乙醇。
3、若手动操作，在实验开始前将恒温混匀仪预热至60℃。
4、Magbeads ZN严禁冰冻和高速离心，否则可能会对Magbeads ZN造成不可逆的损害。Magbeads ZN每次使用时请充分振荡混合均匀。
5、用前请先检查Buffer MPL 和 20% SDS是否出现结晶或沉淀，如有结晶或沉淀现象，可在37°C水浴几分钟，即可恢复澄清。
操作步骤（手动，以2mL血浆为例）
1、按下表向离心管中依次加入30 μL Proteinase K、2 mL血浆、100 μL 20% SDS，放于60℃、1200 rpm恒温混匀仪上震荡20分钟，孵育结束后将离心管冰浴5-10
分钟。
注：如无恒温混合仪，将离心管涡旋震荡10秒钟后放于60℃水浴锅中孵育20分钟，期间每隔7分钟涡旋震荡10秒钟。
为避免蛋白酶K失活，请按下表试剂顺序依次加入，请勿将SDS直接加到蛋白酶K溶液中。
Regent | 血浆体积 | |||
1 mL | 2 mL | 4 mL | 10mL | |
Proteinase K | 15μL | 30μL | 60μL | 150μL |
血浆样本 | 1 mL | 2 mL | 4 mL | 10mL |
20% SDS | 50μL | 100μL | 200μL | 500μL |
总体积 | 1.065mL | 2.13 mL | 4.26mL | 10.65mL |
2 ．孵育过程中，按下表准备裂解液/磁珠混合液，并混合均匀。
Regent | 血浆体积 | |||
1 mL | 2 mL | 4 mL | 10 mL | |
Buffer MPL | 1 mL | 2 mL | 4 mL | 10 mL |
异丙醇 | 0.25 mL | 0.5 mL | 1 mL | 2.5 mL |
Magbeads ZN | 15 μL | 30 μL | 60 μL | 150 μL |
总体积 | 1.265 mL | 2.53 mL | 5.06 mL | 12.65 mL |
3 ．将步骤2中准备的裂解液/磁珠混合液加到步骤1样本管中。涡旋震荡1分钟，然后 手工上下颠倒或使用混匀仪混匀5-10分钟，使磁珠一直处于悬浮状态。
4 ．将离心管放于磁力架上静置，待磁珠吸附到磁力架上，管内溶液变澄清后，翻转 离心管冲洗瓶盖上残留磁珠，再放置1分钟左右，之后弃去溶液。
5 ．向离心管中加入1 mL Buffer GW1（使用前请检查是否已加入无水乙醇），震荡混 匀后将混悬液转移到新的1.5 mL离心管中。
6 ．将离心管固定于磁力架上静置1分钟，之后弃去溶液。
7 ．向离心管中加入1 mL Buffer GW1（使用前请检查是否已加入无水乙醇），涡旋震 荡5秒钟后放于25℃、 1600 rpm的恒温混匀仪上震荡结合2分钟。
8 ．将离心管固定于磁力架上静置1分钟，之后弃去溶液。
9 ．向离心管中加入1 mL Buffer GCW2（使用前请检查是否已加入无水乙醇），涡旋 震荡5秒钟后放于25℃、 1600 rpm的恒温混匀仪上震荡结合2分钟。
10．将离心管固定于磁力架上静置1分钟，之后弃去溶液。
11．重复步骤9-10。
12．离心管短暂离心后，将其重新固定于磁力架上用移液器去除管底溶液，开盖室温 放置5-10分钟使乙醇充分挥发。
13．向离心管中加入50-100 μL RNase-Free Water后涡旋震荡使磁珠充分悬浮于洗脱液中，之后将离心管固定于25℃、 1600 rpm的恒温混匀仪上震荡洗脱10分钟。
14．将离心管固定于磁力架上静置2分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后用移 液器将洗脱液转移至新的离心管中-20℃保存备用。
操作步骤（与CWE240匹配，以4mL 血浆为例）
1 ．按下表向24 DW深孔板中加入试剂：
血浆体积 | 2 mL | 4 mL |
位置 | 试剂及用量 | 试剂及用量 |
Plate 1 | Proteinase K：30 μL 血浆：2 mL 20% SDS：100 μL | Proteinase K：60 μL 血浆：4 mL 20% SDS：200 μL |
Plate 2 | Buffer GW1: 1 mL | Buffer GW1: 1 mL |
Plate 3 | Buffer GW1: 1 mL | Buffer GW1: 1 mL |
Plate 4 | Buffer GCW2: 1 mL | Buffer GCW2: 1 mL |
Plate 5 | Buffer GCW2: 1 mL | Buffer GCW2: 1 mL |
Plate 6 | RNase-Free Water: 100 μL | RNase-Free Water: 100 μL |
2 ．将“24 DW Plate and Tips Pack for CWE240”放入CWE240核酸提取仪的相应位置 中，运行“CW2560 ctDNA程序”。
3 ．约25分钟后仪器暂停，将“Plate 1”拿出仪器后立即放到冰上5-10分钟，然后按下 表加入试剂。
血浆体积 | 2 mL | 4 mL |
位置 | 试剂及用量 | 试剂及用量 |
Plate 1 | Buffer MPL：2 mL 异丙醇： 0.5 mL Magbeads ZN：30 μL | Buffer MPL：4 mL 异丙醇： 1 mL Magbeads ZN：60 μL |
4 ．将24 DW深孔板放回仪器中，继续运行程序。约45分钟后程序运行结束。把 “Plate 6”中的DNA洗脱产物转移至离心管中-20℃保存备用。