磁珠法唾液DNA提取试剂盒说明书
货号：M03830/M03840
规格：96 preps
英文名称：Magbead Saliva DNA Kit
保存：室温（15-30℃），1年
产品内容：
Component | 96 preps |
Buffer KCL | 80 mL |
Buffer GW1（concentrate） | 80 mL |
Buffer GW2（concentrate） | 26 mL |
Buffer MW3 | 80 mL |
Buffer EB | 30 mL |
Proteinase K | 2×25 mg |
Proteinase K Storage Buffer | 2×1.25 mL |
Magbeads PN | 2×1 mL |
产品说明（仅供参考）:
该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
该试剂盒提供了一种简单、快速、高效的唾液DNA提取方法，适用于从唾液中提取基因组DNA。在高盐存在时，DNA结合于硅基包被的Magbeads表面。漂洗后，高纯度的DNA被洗脱于Buffer EB或去离子水中。纯化得到的DNA纯度好（A260/280 的比值在1.7-1.9之间），完整度高（>15 kb）可用于二代测序、定量PCR、芯片检测等下游实验。
该试剂盒可与康为CWE2100 32通道核酸提取仪和康为CWE9600 96通道核酸提取仪进行匹配使用，简单、快速地进行高通量提取，大大降低了实验者的工作量和实验中的人为误差。
自备仪器、试剂
- 恒温混匀仪
2）2/15 ml磁力架
3）32通道核酸提取仪
4）96通道核酸提取仪
5）96 DW Plate
6）8 channel Comb
7）Spin tips pack
8）无水乙醇
实验前准备及重要注意事项
1．向25 mg Proteinase K中加入1.25 ml Proteinase K Storage Buffer使其溶解，之后 -20℃保存。配置好的Proteinase K溶液勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2．第一次使用前按照试剂瓶标签向Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇并做好标记。
3．Magbeads严禁冰冻、离心。冰冻、离心可能会对Magbeads造成不可逆的损害。
操作步骤
Ⅰ、手动单管操作
1．依次向2.0 mL离心管中加入20 μl蛋白酶K、350 μl唾液和500 μl Buffer KCL。
2．涡旋震荡混匀后，将离心管放于65℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡裂解20分钟,形成裂解液。
注意：如无恒温混匀仪，将离心管涡旋震荡10秒钟后放于65℃水浴锅中孵育20分钟，期间每隔5分钟涡旋震荡10秒钟。
3．将离心管从恒温混合仪上取下，短暂离心后加入20 μl Magbeads PN。之后将离心管放于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡裂解10分钟或将离心管连续颠倒混匀15分钟。
4．将离心管放于磁力架上静置1分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后充分弃去溶液（保持离心管固定于磁力架上）。
5 ．将离心管从磁力架上取下，加入750µLBuffer GW1（使用前请检查是否已加入无水乙醇）后涡旋点震1分钟或涡旋震荡5秒钟后放于25℃、 1600 rpm的恒温混匀仪 上震荡混匀2分钟（震荡过程中确Magbeads处于混匀状态）。之后将离心管放于 磁力架上静置1分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将离 心管盖上的杂质洗落后彻底弃去溶液（保持离心管固定于磁力架上）。
6 ．重复步骤5。
7 ．将离心管从磁力架上取下，加入750 μl Buffer GW2（使用前请检查是否已加入无 水乙醇）后涡旋点震1分钟或涡旋震荡5秒钟后放于25℃、 1600 rpm的恒温混匀仪 上震荡混匀2分钟（震荡过程中确Magbeads处于混匀状态）。之后将离心管放于 磁力架上静置1分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将离 心管盖上的杂质洗落后彻底弃去溶液（保持离心管固定于磁力架上）。
8 ．保持离心管固定于磁力架上，向离心管中加入750ul Buffer MW3，待悬起的磁珠 重新吸附于磁力架上后立即充分弃去溶液。
9 ．保持离心管固定于磁力架上，用移液器进一步去除离心管管底和管盖上的溶液，之后室温放置5-10分钟，使乙醇挥发干净。
10．将离心管从磁力架上取下，加入50-200 μl Buffer EB。涡旋震荡使磁珠完全悬浮于 洗脱液中后将其放于56℃、 1600 rpm的恒温混匀仪上震荡洗脱10分钟，或将离心 管放于56℃水浴锅中孵育10分钟，期间每隔3分钟涡旋震荡10秒钟。
11．将离心管放于磁力架上静置2分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后用移液 器将洗脱液转移至新的离心管中-20℃保存备用。
Ⅱ、与CWE2100匹配
1 ．按下表向96DW深孔板中加入相应试剂
Position | Reagent |
1&7 Colume | Proteinase K: 20 μl Sample: 350 μl Buffer KCL: 500 μl Magbeads PN: 20 μl |
2&8 Colume | Buffer GW1: 750 μl |
3&9 Colume | Buffer GW1: 750 μl |
4& 10 Colume | Buffer GW2: 750 μl |
5& 11 Colume | Buffer MW3: 750 μl |
6& 12 Colume | Buffer EB: 100 μl |
4 ．将加入试剂的深孔板和磁套放于CWE2100的相应位置，运行唾液提取程序，约 28分钟后程序运行结束，取出深孔板和磁套。
5 ．将深孔板6&12列中的洗脱产物转移至1.5 ml离心管中低温保存。
Ⅲ、与CWE9600匹配
1 ．按下表向96DW深孔板中加入相应试剂
Position | Reagent |
Plate 1 | Proteinase K: 20 μl Sample: 350 μl Buffer KCL: 500 μl Magbeads PN: 20 μl |
Plate 2 | Buffer GW1: 750 μl |
Plate 3 | Buffer GW1: 750 μl |
Plate 4 | Buffer GW2: 750 μl |
Plate 5 | Buffer MW3: 750 μl |
Plate 6 | Buffer EB: 100 μl |
2 ．将加入试剂的深孔板和磁套放于CWE9600的相应位置，运行唾液提取程序，约 28分钟后程序运行结束，取出深孔板和磁套。
3 ．将Plate 6中的洗脱产物转移至1.5 ml离心管中低温保存。