磁珠法游离DNA提取试剂盒说明书
货号: M03860
规格：96T
英文名称：Magbead Free-Circulating DNA Kit
保存：Magbeads ZN 2-8℃，其余组分室温；未开封，1年
产品组成：
Component | 96 preps | |
Buffer MPL | 40 ml | |
Buffer CW1 | 160 ml | |
Buffer GW2（concentrate） | 50 ml | |
Buffer EB | 30 ml | |
Proteinase K | 2×25 mg | |
Proteinase K Storage Buffer | 2× 1.25 ml | |
Magbeads ZN | 2× 1 ml | Magbeads ZN严禁冰冻和高速离心 |
产品简介
该试剂盒适用于从血浆、血清、羊水等无细胞体液中纯化回收游离DNA（Free circulating/Cell-free DNA）。高盐时，游离DNA结合于硅基包被的磁珠表面。漂洗后，游离DNA洗脱于Buffer EB或去离子水中。游离DNA的得率与样品类型、储存条件、时间以及个体间差异有很大关系。纯化得到的游离DNA质量稳定、可靠，可用于定量PCR、产前诊断等下游实验。该试剂盒可与磁棒法磁珠自动纯化系统、液体工作站配套使用，简单、快速地进行高通量提取，大大降低了实验者的工作量和实验中的人为误差。
自备试剂：
1．KingFisher Flex
2．恒温混匀仪
3．无水乙醇
实验前准备及重要注意事项
1．向蛋白酶K粉末中加入指定用量的Proteinase K Storage Buffer使其溶解，之后-20℃保存。配置好的Proteinase K勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
Proteinase K Storage Buffer： 每支加入1.25 ml
2．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取得率低。
3．第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer GW2中加入无水乙醇并做好标记。
4．Magbeads ZN严禁冰冻和高速离心，否则可能会对Magbeads ZN造成不可逆的损害。
5．Magbeads ZN在使用前需涡旋振荡20秒使其充分混匀。
操作步骤
手动操作步骤
1．向1.5 ml离心管中加入20 μl Proteinase K、300 μl血浆、360 μl Buffer MPL和20 μl Magbeads ZN。
2．将离心管放于56℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡裂解10分钟，或涡旋震荡混匀后56℃水浴10分钟，期间涡旋混匀3次。
3．将离心管从恒温混匀仪上取下，之后放于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡裂解10分钟或连续颠倒混匀10分钟。
4．将离心管放于磁力架上静置2分钟，之后弃去溶液。
5．向离心管中加入600 μl Buffer CW1，之后将离心管放于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡2分钟或涡旋震荡1分钟。
6．将离心管放于磁力架上静置2分钟，之后弃去溶液。
7．重复步骤5-6。
8．将离心管从磁力架上取下短暂离心，之后将离心管重新放于磁力架上，用移液器进一步去除管底溶液。
9．向离心管中加入600 μl Buffer GW2（使用前请检查是否已加入无水乙醇），之后将离心管放于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡2分钟或涡旋震荡1分钟。
10．将离心管放于磁力架上静置2分钟，之后弃去溶液。
11．重复步骤9-10。
12．将离心管从磁力架上取下短暂离心，之后将离心管重新放于磁力架上，用移液器进一步去除管底溶液。
13．保持离心管固定于磁力架上静置5-10分钟，使乙醇充分挥发。
14．向离心管中加入50 μl Buffer EB，涡旋震荡混匀后将离心管放于56℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡10分钟或放于56℃水浴锅中孵育10分钟，期间涡旋混匀3次。
15．将离心管放于磁力架上静置2分钟，之后将洗脱液转移至新的离心管中低温保存。
与KingFisher Flex匹配
- 按下表将样品与试剂加入相应位置：
名称 | 类型 | 试剂及用量 |
Sample Plate | DW 96 深孔板 | Proteinase K: 20 μl Plasma: 300 μl Buffer MPL: 360 μl |
Wash Plate I | DW 96 深孔板 | Buffer CW1: 750 μl |
Wash Plate II | DW 96 深孔板 | Buffer CW1: 750 μl |
Wash Plate III | DW 96 深孔板 | Buffer GW2: 750 μl Magbeads: 20 μl 96 DW Comb |
Wash Plate IV | DW 96 深孔板 | Buffer GW2: 750 μl |
Elution Plate | DW 96 深孔板 | Buffer EB: 60 μl |
2．打开KingFisher Flex仪器，运行CW2522_Flex程序，按照仪器提示将深孔板与磁套放入仪器中。
3．约50分钟后程序运行结束，取出深孔板。将洗脱板用封口膜封闭后冷冻保存。