磁珠法植物DNA提取试剂盒

磁珠法植物DNA提取试剂盒（Magbead Plant DNA Kit）说明书

货号： M03870

规格：96 T

保存条件：室温（15-30℃)，1年

产品内容：

产品简介

该试剂盒提供了一种简单、高效的植物DNA提取方案。植物细胞经物理方法破碎后，裂解产 物中的DNA在高盐存在时结合于硅基包被的磁珠表面。漂洗后，DNA被洗脱于Buffer TB或去离子 水中。提取得率与样品类型以及细胞破碎效果有很大关系，提取得到的DNA可用于二代测序、 PCR检验等下游实验。

自备仪器、试剂

1. 96 DW Plate, 8 tip Com, Spin tips pack

2. 无水乙醇

实验前准备以及注意事项 1. 第一次实验前按照试剂瓶标签上的说明向Buffer GW1中加入指定用量的无水乙醇； 2. 客户需配置75%乙醇用于漂洗；3. Magbeads PN严禁冰冻、高速离心。冰冻、高速离心可能会对Magbeads造成不可逆的损害。

操作步骤（仅供参考）

手动操作

1. 植物材料的破碎：

方案1：

1. 称取经液氮充分研磨好的新鲜植物样品粉末约50-100 mg或干燥样品粉末约30 mg，迅速转 移到预先装有400 µL Buffer PLS和5 µL RNase A（10 mg/mL）的离心管中，迅速颠倒混匀 后，瞬时离心，置于恒温混匀仪70℃, 1600 rpm ，10 min。（提取多糖多酚植物在Buffer PLS中加入β巯基乙醇，使其终浓度为5%，可提高核酸提取效果）

方案2：

1）向2.0 mL离心管中加入50 -100 mg新鲜植物材料或20 mg干燥植物材料； 2）用液氮速冻后用玻璃将植物材料充分研磨至粉状；向离心管中加入400 μL Buffer PLS和5 µL RNaseA（10 mg/mL），迅速颠倒混匀后置于恒温 混匀仪70℃, 1600 rpm ，10 min。（提取多糖多酚植物在Buffer PLS中加入β巯基乙醇，使其 终浓度为5%，可提高核酸提取效果）

方案3：

1）向2.0 mL离心管中加入50 -100 mg新鲜植物材料或20 mg干燥植物材料；

2）向离心管中加入400 μL Buffer PLS、5 μL RNaseA (10 mg/mL)和1颗钢珠，之后立即将离 心管固定于组织破碎仪中震荡破碎；

3）将离心管从组织破碎仪中取出后，瞬时离心，置于恒温混匀仪70℃, 1600 rpm ，10 min。 2. 12,000 rpm (~13,400×g)离心4 min后，转移全部上清至新的1.5 mL离心管中。

3. 向1.5 mL离心管中加入550 μL BufferZB和20 µL Magbeads PN，颠倒混匀30 s，瞬时离心，室温静置5 min，其间颠倒混匀数次。

4. 瞬时离心，将离心管转移至磁力架吸附1min（直至溶液澄清），之后弃去溶液，期间避免接 触磁珠。

5. 将离心管从磁力架上取下，加入650 µL Buffer GW1，涡旋混匀10 s，重悬磁珠，之后将离心管 固定于25℃、 1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀2 min或涡旋震荡1 min。

6. 将离心管固定于磁力架上静置1 min，之后充分弃去溶液；

7. 重复步骤5-6；

8. 将离心管从磁力架上取下，加入650 µL 75%乙醇，涡旋混匀10 s，重悬磁珠，之后将离心管固 定于25℃、 1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀2 min或涡旋震荡1 min

9. 将离心管固定于磁力架上静置1 min，之后充分弃去溶液

10. 重复步骤8-9；

11. 将离心管短暂离心后用移液器再次去除管底溶液，之后室温放置5-10 min 使乙醇充分挥发；

12. 向离心管中加入100 μL Buffer TB，涡旋震荡时磁珠充分悬浮与洗脱液中后将其放于65℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡裂解10分钟，或在65℃水浴锅中孵育10 min，期间涡旋震荡4次。

13. 将离心管固定于磁力架上静置2 min，待磁珠充分吸附于离心管侧壁后将洗脱液转移至新的离心管中-20℃保存备用。