产品详情
聚丙烯酰胺凝胶DNA回收试剂盒使用说明书
货号：M03990
规格：20T /50T
保存：室温(15℃-25℃) 干燥保存，复检期12个月。
试剂盒内容：
名称 | 20T | 50T |
溶液A | 5ml | 15ml |
溶液B | 20ml | 50ml |
漂洗液 | 15ml | 15ml |
洗脱液 | 1.5ml | 1.5ml |
研磨杵 | 20个 | 50个 |
过滤柱 | 20个 | 50个 |
吸附柱 | 20个 | 50个 |
产品简介：
本试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅基质材料和独特的缓冲液系统，从聚丙烯酰胺凝胶上回收DNA片段，同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。使用本试剂盒回收的DNA可适用于后续各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。
操作步骤（仅供参考）：
第一次使用前请先在15ml漂洗液中加入60ml无水乙醇，所有离心步骤均可使用台式离心机在室温下离心。
- 将单一的目的DNA条带从聚丙烯酰胺凝胶中切下（尽量切除多余部分），放入1.5ml离心管中，称取重量，用研磨杵将胶尽量挤压碎。加入2倍体积的溶液A吹打混匀（每100mg胶加入200ul溶液A），75℃水浴30分钟。
- 用1ml的去尖吸头吸取混合物至过滤柱中（将胶一起吸入，溶液过多时可分次加入），13,000rpm离心1分钟。将收集管中的滤出液转入新离心管中。
- 取6倍体积溶液B加入原离心管中（每100mg胶加入600ul），清洗管壁后加入过滤柱中(溶液过多时可分次加入)，颠倒过滤柱或轻轻吹打几次混匀，13,000rpm离心1分钟。将所有收集的滤出液混合。
- 将总滤出液混匀后加入吸附柱中（溶液过多时可分次加入），13,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放入收集管中。
- 向吸附柱中加入600ul漂洗液（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），13,000rpm离心30-60秒，倒掉废液，将吸附柱重新放入收集管中。
- 向吸附柱中加入600ul漂洗液，13,000rpm离心30-60秒，倒掉废液。
- 将离心吸附柱放回收集管中，13,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液。将吸附柱开盖置于室温1-2分钟，彻底晾干，以防止残留的漂洗液影响下一步的实验。
- 将吸附柱放到一个干净离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加适量65-70℃预热的洗脱缓冲液20-30ul，室温放置2分钟。13,000rpm离心2分钟收集DNA溶液。注意：①为了增加回收效率，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，13,000rpm再次离心1分钟。②洗脱缓冲液体积不应少于20ul，体积过小影响回收效率。③洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5之间。
- DNA回收产物直接后续实验或者-20℃保存。
注意事项：
1． 电泳时最好使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。
2． 切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。
3． 本试剂盒对<50bp DNA片段回收效率偏低（30%左右），如要回收，应加大结合液的体积，延长吸附和洗脱的时间。
4． 回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越小，回收率越低。