伊文斯蓝/埃文斯蓝溶液0.5%

伊文斯兰染色液(0.5%)说明书

货号：R00050

规格：100mL

保存：室温，避光，12个月。

产品说明：

伊文斯兰(Evans Blue)又称偶氮蓝。伊文斯兰与台盼蓝都是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性和细胞是否存活。活细胞因有外排功能而无法被伊文斯兰染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。因此可以通过此方法在显微镜下区分死细胞与活细胞，但无法区分死亡与坏死。

操作说明：（仅供参考）

1. 血脑屏障通透性
2. 取处理后的实验动物(以小鼠为例)，静脉注射Evans Blue Stain (0.5%)，小鼠眼睛、皮肤出现蓝色。0.5～1h后处死小鼠，取目的脑组织。
3. 脑组织置于1.5mL离心管中，加入1mL PBS，迅速用组织匀浆器将脑组织制成匀浆， 离心。
4. 取上清，加入等量三氯乙酸，4℃孵育。该步骤亦可采用如下操作：取上清，按上清：丙酮=3：7比例加入丙酮，室温孵育24h。
5. 离心15min。
6. 取上述溶液，用分光光度计测620 nm处吸光值(OD值)。同时测定已知不同梯度的标准依文思蓝的OD值，绘制标准曲线。根据标准曲线计算出待测样品的伊文斯兰含量。
7. 活细胞染色
8. 取100μL重悬细胞到常规离心管内，入100μL Evans Blue Stain轻轻混匀染色(染色时间可适当延长，但不宜超过10min)。
9. 吸取少量经过染色后的细胞，用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量，每个细胞样品至少数500个细胞，数出蓝色细胞和细胞总数。细胞存活率计算公式如下：
10. 细胞存活率＝(细胞总数－蓝色细胞数)/细胞总数×100%

注意事项：

1. Evans Blue Stain使用过程中请小心防护。
2. 细胞染色时，注意凋亡小体偶尔也有拒染现象。
3. 血脑屏障通透性实验中，Evans Blue Stain注射量应根据不同动物以及动物的重量调整。
4. 最好采用低温冷冻离心机进行离心。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。