NBT solution 0.05% (0.5mg/ml pH7.8 )

NBT溶液说明书

保存：-20℃避光保存，有效期6个月。

产品说明（仅供参考）:

该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

植物组织在胁迫环境条件下会产生多种活性氧（ROS），ROS活性非常大且极其不稳定，因此ROS的检测通常因其最终产物而定。超氧阴离子是活性氧的一种，属于一种含氧自由基，能将NBT（氮蓝四唑）还原成不溶于水的蓝色甲瓒化合物，从而定位组织中的超氧阴离子。

根据上述基本原理也称为NBT染色法，用于植物活组织中的超氧阴离子染色。一般应用于较嫩的根尖、叶片等的整体染色，染色后有超氧阴离子聚集的部位呈蓝色至深蓝色。

自备材料：

新鲜的植物叶片或根、自来水、蒸馏水、95%乙醇、照相机

使用说明（仅供参考）

1. 样本准备：采集经胁迫（例如重金属）的采集植物幼苗或根尖，自来水稍洗净，置于滤纸上吸干多余水分。
2. 染色：将植物幼苗或根尖浸入NBT溶液中，常温避光浸染2~6h，至阳性部位出现深蓝色，其余部位为淡蓝色或近无色或呈植物本身的颜色即可。（根据植物幼嫩程度、显色程度调整染色时间）
3. 脱色：用镊子将植物幼苗或者叶片小心取出，浸入蒸馏水中来回漂洗3~5次，置于滤纸上吸干多余水分后，浸入95%乙醇中40℃处理3~16h，目的是脱去植株幼苗或者叶片本身的叶绿素或者淡蓝色背景，处理期间可多次更换新鲜的95%乙醇。
4. 观察：用镊子取出植株幼苗或者叶片，浸入蒸馏水中来回漂洗3~5次，置于滤纸上吸干多余水分后，将样品取出拍照记录染色结果。

注意事项：

1. 因任何外在因素都可能刺激植物应激产生超氧阴离子，因此植物样本需要新鲜采集，并尽快完成染色。建议做阴性及阳性空白对照组。
2. 样本染色完成后尽快拍照保存结果。
3. 染色和脱色步骤也可参考如下建议操作：组织放入染液中，抽真空，-0.1MPa保持负压20~30min，再于室温下静置染色60min，弃染色液；加入95%乙醇，于70~80℃水浴锅脱色，每隔10min换一次95%乙醇，待样品绿色全部褪去后可停止脱色。
4. 我司生产的生化试剂如无特殊标注，基本为非无菌包装，若用于细胞实验，请提前做好预处理。需低温保存的产品，一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
5. 产品信息仅供参考。本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。