福尔根DNA染色液(Feulgen stain)
货号：R02270
规格：3×50ml/3×100ml
保存：4℃，避光，6个月
试剂盒组成：
规格 名称 | 3×50ml | 3×100ml | Storage | |
试剂A：Schiff reagent | 50ml | 100ml | 4℃ 避光 | |
试剂B: SO2水 | B1：弱酸溶液 | 50ml | 100ml | RT避光 |
B2：亚硫酸盐溶液 | 50ml | 100ml | RT避光 | |
简介：
脱氧核糖核酸(DNA)染色方法有Feulgen法、甲基绿-派洛宁法、吖啶橙荧光法等，其中最经典的是Feulgen法, Feulgen法是一种经典的酶组织化学法。
Feulgen stain 的原理在于：DNA经温和的弱酸(例如盐酸)水解后，嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键被打开，并且使脱氧核糖与磷酸间的磷酯键断开，在脱氧核糖的一端形成游离的醛基。醛基在原位与Schiff reagent结合，形成紫红色化合物，使细胞内含有DNA的部位呈紫红色。紫红色的产生是因为反应产物的分子内有醌基（醌基是一个具有颜色的发色团），所以凡含有DNA的部位，就呈紫红色。但是该水解作用不影响核糖-嘌呤结合键，因此RNA用此法处理后则分解，所以该法不适用于证明RNA。
操作步骤（仅供参考）：
(一) 石蜡切片染色
1、 组织固定：Carnoy固定的石蜡切片较好，10%的福尔马林亦可，不宜使用Bouin固定液。
2、 弱酸工作液的配制：
按照弱酸溶液:蒸馏水=1:4的比例配制，即取弱酸溶液1份、蒸馏水4份，充分混合，即获得弱酸工作液。
3、 石蜡切片脱蜡至双蒸水。
4、 切片室温下在弱酸工作液中浸洗一下。
5、 切片放入已预热到60℃的弱酸工作液，孵育8min。
6、 切片放入室温的弱酸工作液中冲洗1min。
7、 蒸馏水冲洗。
8、 切片入Schiff reagent内，置于室温暗处染色30~60min。
9、 在上述染色过程中，配制SO2水工作液。
按照亚硫酸盐溶液：弱酸溶液：蒸馏水=5:1:94的比例配制SO2水工作液，即取亚硫酸盐溶液5份、弱酸溶液1份、蒸馏水94份，充分混合，即获得SO2水工作液。即配即用，不易久置。
10、 用新鲜配制的SO2水工作液洗切片3次，每次90s。
11、蒸馏水中洗净。
12、经系列乙醇脱水。
13、二甲苯透明并封片。
(二)冰冻切片染色
1、 冰冻切片预处理：先用乙酸1份、无水乙醇3份混合后，即为固定液，固定10min。
2、 由无水乙醇脱水--逐级下行--双蒸水。
3、 弱酸工作液的配制：
按照弱酸溶液:蒸馏水=1:4的比例配制弱酸工作液，即取弱酸溶液1份、蒸馏水4份，充分混合，即获得弱酸工作液。
4、 余下步骤同上述石蜡切片染色。
染色结果：
细胞核内DNA 红紫色
阴性对照： 将同样切片经上述步骤， 只有步骤5改为放入室温的弱酸工作液，室温放置15min。其结果为细胞核DNA阴性。
注意事项：
- 水解时间很重要，并且应使用恰当的固定时间。不同的固定液水解时间不一样。
固定液 | 水解时间(min) |
Carnoy固定液 | 8min |
Helly固定液 | 8min |
Susa固定液 | 18min |
福尔马林 | 8min |
Zenker液 | 5min |
2、 注意Schiff reagent的纯净程度，若变浅粉红亦可考虑使用，颜色变红则不能用。
3、 去除切片上多余的Schiff reagent的方法应以SO2水洗法为好。
4、 应作阴性对照试验。
5、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。