改良Harris苏木素染色液说明书
货号:R02330
规格:100mL/500ml
保存:RT密封,避光,有效期1年。
产品说明:
苏木素为碱性天然染料,可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA,在DNA双螺旋结构中,两条核苷酸链上的磷酸基向外,使DNA双螺旋的外侧带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木素在碱性溶液中呈蓝色,所以细胞核被染成蓝色。
操作步骤(仅供参考):
(一) 石蜡切片染色
1、 切片脱蜡至水
① 二甲苯作用2次, 每次5~10min。
②(可选)无水乙醇作用2次, 每次3~5min。
③ 95%的乙醇 3~5min
④ 90%的乙醇 3~5min
⑤ 80%的乙醇 3~5min
⑥ 自来水或蒸馏水冲洗 1~3min
2、染色
①改良Harris苏木素染色液 5~8min
②自来水或蒸馏水冲洗 5~10s
③(可选)1%盐酸乙醇分化 2~5s
④自来水冲洗 20~30s
⑤(可选)弱碱性水返蓝 20~40s
⑥自来水冲洗 30~60s
⑦伊红染色 3~5min
⑧自来水冲洗 1~5s
3、脱水、透明、封固
①80%乙醇 10~20s
②90%乙醇 10~20s
③95%乙醇作用2次, 每次1~2min。
④无水乙醇作用2次, 每次2~3min。
⑤二甲苯透明3次, 每次2~3min。
⑥中性树脂封片。
染色结果:
细胞核呈蓝色;细胞质、肌纤维、胶原纤维、甲状腺胶质等呈深浅不一的红色;角蛋白、红细胞等呈明亮的橙红色。
(二) 冰冻切片染色
1、乙醚-乙醇混合固定液 5~10s
2、自来水冲洗 2~5s
3、改良苏木素染色液滴染 1~2min(可加热至50℃)。
4、自来水冲洗 2~5s
5、(可选)1%的盐酸乙醇分化液 2~5s
6、自来水冲洗 2~5s
7、(可选)弱碱性水返蓝 2~5s
8、自来水冲洗 5~10s
9、伊红染色液染色 2~5s
10、水洗 1~2s
11、80%的乙醇 1~2s
12 、95%的乙醇 1~2s
13、无水乙醇 2~5s
14、苯酚二甲苯(1:3) 2~5s
15、二甲苯透明3次, 每次2~5s。
16、中性树脂封片
染色结果:
细胞核呈蓝色;细胞质、纤维呈红色。
(三) 细胞染色
1、 4%的多聚甲醛固定 10~20min。
2、 自来水冲洗2次, 每次2min。
3、 蒸馏水冲洗2次, 每次2min。
4、 染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤,作用时间应相应缩短。
染色结果:
细胞核呈蓝色;细胞质、纤维呈红色。
注意事项:
1、 切片脱蜡应尽量干净。
2、 乙醇应经常更换新液。
3、 盐酸乙醇分化液的分化时间应该依据切片厚薄、组织的类别和盐酸乙醇分化液的新旧而 定,另外分化后自来水冲洗时间应该足够,以便彻底清洗酸。
4、 乙醚-乙醇混合固定液是由乙醚和95%乙醇等量混合而得,再加入适量乙酸,密闭保存。
5、 冷冻切片染色时间尽量要短。
6、 促蓝液常使用0.2~1%氨水水溶液或Scoot促蓝液或0.1~1%碳酸锂水溶液。
7、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。