DAB染色液(1mg/mL pH3.8)说明书
货号:R02990
规格:100mL/500mL
保存:-20℃避光保存,有效期12个月
产品简介:
植物组织在胁迫环境条件下会产生多种活性氧(ROS),ROS活性非常大且极其不稳定,因此ROS的检测通常因其最终产物而定。过氧化氢是活性氧的一种。在过氧化氢酶的催化下,过氧化氢能与DAB(3,3-二氨基联苯胺四盐酸盐)迅速反应生成棕红色化合物从而定位组织中的过氧化氢。
DAB染色液(1mg/mL,pH3.8)由DAB和磷酸盐组成,用于植物活组织中的过氧化氢染色。一般应用于较嫩的根尖、叶片等的整体染色,染色后有过氧化氢聚集的部位呈棕色至深棕色。
该产品仅用于科研领域,不用于临床诊断或其他用途。
操作步骤(仅供参考):
1、样本准备:采集经胁迫(例如重金属)的植物幼苗或根尖,自来水稍洗净,置于滤纸上吸干多余的水分。
2、染色:将植物幼苗或根尖浸没在DAB染色工作染液中,常温避光染色2~6h,至阳性部位出现深棕色,其余部位近无色或者呈植物本身的颜色即可。(根据植物幼嫩程度和显色程度调整染色时间)
3、脱色:用镊子将植株幼苗或者叶片小心取出,浸入蒸馏水中来回漂洗3~5次,置于滤纸上吸干多余水分后,浸入95%乙醇中40°℃处理3~16h,目的是脱去植株幼苗或者叶片本身的叶绿素,脱色期间可多次更换新鲜的95%乙醇。
4、观察:用镊子取出植株幼苗或者叶片,浸入蒸馏水中来回漂洗3~5次,置于滤纸上吸干多余水分后,拍照。(吸干水分后可将样本转入DAB染色样本保存液中浸泡30min,样本可置于该保存液中常温保存一周。)
注意事项:
1、DAB染色工作液需-20℃冻存,如1周内频繁使用可4°C避光保存。存放时间过久,会影响显色。
2、因过氧化氢容易分解,且任何外在因素都可能刺激植物应激产生过氧化氢,因此植物样本需要新鲜采集,并尽快完成染色。建议做阴性及阳性空白对照组。
3、样本染色完成后尽快拍照保存结果。
4、DAB可能具致癌性,请小心操作,避免直接接触。
5、染色和脱色步骤也可参考如下建议操作:组织放入染液中,抽真空,-0.1MPa保持负压
20~30min,再于室温下静置染色60min,弃染色液;加入95%乙醇,于70~80°℃水浴
锅脱色,每隔10min换一次95%乙醇,待样品绿色全部褪去后可停止脱色。
6、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
7、试剂开封后请尽快使用,以防影响后续实验效果。