产品详情
碱性磷酸酶染色试剂盒(改良Gomori钙钴法)说明书
货号：R03080
规格：3×50m
保存：2-8℃，避光保存，有效期6个月。
产品内容：
名称 | 3×50ml | Storage |
试剂(A):ALP孵育液 | 50ml | 2-8℃，避光 |
试剂(B):Co溶液 | 50ml | RT，避光 |
试剂(C):硫化液 | 2×1ml | RT，避光 |
试剂(D):ALP对照液 | 10ml | 2-8℃，避光 |
产品说明：
碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH 9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处（细胞膜），如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮。此酶还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜及吞饮小泡。
本试剂盒用金属沉淀法来显示碱性磷酸酶活性。此法以天然存在的β-甘油磷酸钠为底物，经酶水解释放出磷酸，立即被钙离子沉淀为磷酸钙，再次被置换为磷酸钴，最终被硫化液置换为黑色沉淀。
自备材料：
蒸馏水、温箱或水浴锅
操作步骤（仅供参考）：
(一)石蜡切片染色
- 石蜡切片脱蜡至蒸馏水。
- 切片入ALP孵育液中，37℃孵育2~12h。流水洗2min，入蒸馏水。
- 入试剂B中，37℃孵育5min。流水洗5min后，入蒸馏水。
- 在上述过程中，配制硫化工作液，即取试剂(C)用蒸馏水或者去离子水稀释50倍, 即为硫化工作液，即配即用。切片入硫化工作液，孵育1-2min。流水洗10min，入蒸馏水。
- (可选)核固红复染细胞核，蒸馏水洗。
- 石蜡切片常规脱水、透明，树胶封片。
(二)冰冻切片染色
- 冰冻切片在丙酮-氯仿等量混合液内，4℃固定2~5min。
- 切片入ALP孵育液，37℃孵育5~15min。流水洗2min，入蒸馏水。
- 入试剂B中，37℃孵育5min。流水洗5min后，入蒸馏水。
- 在上述过程中，配制硫化工作液，即取试剂(C)用蒸馏水或者去离子水稀释50倍,即为硫化工作液，即配即用。切片入硫化工作液，孵育1-2min。流水洗10min，入蒸馏水。
- (可选)核固红复染细胞核，蒸馏水洗。
- 冰冻切片用甘油明胶封片。
染色结果：
酶所在阳性部位 | 黑色硫化钴沉淀 |
细胞核 | 红色（核固红复染） |
阴性对照(可选)：
- 试剂(D)为不含底物的孵育液。取相同的切片入试剂(D)--ALP对照液，而不是ALP孵育液，其余相同。阴性对照结果为阴性。
- (备选方案)切片进入孵育液前，可先经碘液和5%硫代硫酸钠溶液各3min，充分水洗后再进行孵育等步骤,可用此法作阴性对照。
注意事项：
1. ALP孵育液、ALP硫化液易失效，最好分成小份储存，一经开启立即使用。
2. 硫化液具有腐蚀性，操作应小心。
3. 对冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。
4. 样本需新鲜，取材后应立即处理，否则会影响酶的活性。
5. 组织固定需在 4℃冰箱进行，时间不宜超过 24h，否则酶活性会减弱或消失。
6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。