精子形态学染色液 (巴氏法 )

精子形态学染色液(巴氏法)说明书

货号: R03250

规格：4*20mL/4*100mL

保存：RT，避光保存，有效期1年。

产品组成：

产品说明（仅供参考）:

该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

细胞学常规染色普遍使用巴氏(Papanicolaou)法，Papanicolaou Stain最初仅用于检测阴道上皮雌激素水平以及生殖道念珠菌、滴虫等病原体。橘黄G6与EA36或EA50联用使用，可将胞浆染成颜色鲜明的绿色、蓝色和粉色。目前大多数实验室采用成品染液，所以每种染液应注意其改良后的最佳条件。最终胞浆染色应透明可见，核染色质应很容易辨别出来。目前改良的巴氏染色液含有多种离子，具有多色性染色效能。染色后胞质鲜艳、透明性好以及核膜、核仁、染色质结构清晰。

精子形态学染色液(巴氏法)因精子及细胞内不同等电点的蛋白质在相同的酸度下带不同的电荷，能选择性地结合相应的染料而着色。胞核由酸性物质组成，它与碱性染料的亲和力较强；而胞浆则相反，它含有碱性物质和酸性染料的亲和力较大细胞质染色特别采用针对于精子染色的改良EA50染色液，细胞核染色采用自主研发的无毒改良型苏木素染色液，特别适用于精子的染色，亦可用于胸水、腹水、痰液等细胞样本的染色。

自备材料：固定液（如95%乙醇）、系列乙醇、酸性乙醇分化液

操作步骤（仅供参考）

1. 新鲜精液标本完全液化或贮存于-20℃的精液标本复温(室温)。
2. 需要对精子进行洗涤后制片，方法如下：
   1. 在试管内加入精液0.5mL和生理盐水10mL，充分混匀。
   2. 2000转离心10min，去掉大部分的上清液(必要时重复①②步骤)。
   3. 轻轻弹动试管使离心后的精子团悬浮于剩余的盐水中，若精子浓度过高，则以生理盐水适当调整精子密度。
3. 在一张洁净的载玻片上，加入10-20μL精液，并将其均匀涂成一个圆形样本区，涂制好的玻片水平放置，空气中自然干燥。
4. 将干燥后的涂片在95%乙醇溶液中固定5-10分钟。
5. 系列乙醇(80%、70%、50%)从高到低复水，每梯度1min。
6. 蒸馏水或自来水浸泡或冲洗1min。
7. 苏木素染色液染色3-5min。
8. 蒸馏水冲洗30s。
9. 酸性乙醇分化液分化约4-5s，建议镜下观察分化至适当程度。
10. 蓝化液中蓝化4min。
11. 自来水冲洗2min。
12. 50%、70%、80%、95%系列乙醇脱水，每梯度1min。
13. 橘黄G6染色液染色2min。
14. 95%的乙醇(Ⅰ)、(Ⅱ)冲洗各2min。
15. 改良EA50染色液染色5min。
16. 95%的乙醇(Ⅰ)、(Ⅱ)脱水各1min。
17. 无水乙醇(Ⅰ)、(Ⅱ)脱水各1min
18. 二甲苯透明，中性树脂封片。

染色结果：

注意事项：

1. 所有染液均需过滤，需经常更换染液。
2. 酸性乙醇分化液通常为盐酸乙醇，可自行配置使用(0.5mL浓盐酸+99.5mL 75%乙醇)。
3. 产品信息仅供参考。本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。