普鲁士蓝染色试剂盒（Perls stain，伊红法）
货号：R04200
规格：2×50 ml /2×100ml
保存：室温保存，有效期1年。
产品组成：
规格 | 2×50ml | 2×100ml | Storage | |
试剂（A）：Perls stain | A1：Perls stainA | 25ml | 50ml | RT |
A2：Perls stainB | 25ml | 50ml | RT | |
临用前，取A1、A2等量混合，即为Perls stain，不宜提前配制。 | ||||
试剂(B):伊红染色液 | 50ml | 100ml | RT，避光 | |
产品简介：
本产品仅用于科研，不可用于其他。
含铁血黄素（Hemosiderin）是一种血红蛋白源性色素，为金黄色或棕黄色颗粒，因其含铁、金黄色，故称为含铁血黄素。当红细胞被巨噬细胞吞噬后，在溶酶体酶的作用下，血红蛋白被分解为不含铁的橙色血质和含铁的含铁血黄素。
Perls 普鲁士蓝反应（Prus sian blue reaction）又称为含铁血黄素染色，即经过亚铁氰化钾和稀酸处理后可以产生蓝色，常见于吞噬细胞内会间质内，主要显示三价铁盐。Perls 普鲁士蓝是非常经典的组织化学反应，是显示组织内三价铁的一种敏感、传统优良的方法，其染色原理为：亚铁氰化钾溶液使三价铁离子从蛋白质中被稀盐酸分离出来，三价铁与亚铁氰化钾反应，生成一种不溶解的蓝色化合物即三价铁的亚铁氰化物普鲁士蓝，所以该反应被称为普鲁士蓝反应。三价铁的亚铁氰化物是一种很稳定的化合物，在反应后可用红色染色剂进行复染，如核固红、伊红、中性红等。
试剂盒可以很好的区分含铁血黄素和其他色素，但是受限于染色原理，对于低于30µM/g 的铁含量很难形成肉眼可见的阳性标记。
普鲁士蓝染色试剂盒（Perlsstain，伊红法），其复染液采用伊红染色液，也是常用的复染液，该复染液染色时间较核固红染色液要短。
自备材料:
1. 10%的中性福尔马林
2. 系列乙醇
3. 蒸馏水
4. 4%的多聚甲醛
操作步骤（仅供参考）:
（一）石蜡切片染色
1、切片脱蜡至水
切片预热后二甲苯脱蜡 2 次，每次 5min，系列乙醇复水，每级 3min，蒸馏水浸洗 3min。
2、切片入Perls stain（见注意事项3-6） 15～30min
3、蒸馏水充分冲洗 5～10min
4、伊红染色液淡染细胞核 15～30s
5、蒸馏水或75%乙醇快速冲洗 2～3s
6、脱水：75%、85%、95%乙醇每级 3-5s，100%乙醇两次，每次l min
7、透明：二甲苯或环保组织透明脱蜡液透明两次，每次 1-2min
8、封固：中性树胶封片
（二）冰冻切片染色
1、 无需脱蜡，切片取出放置 2-8℃冰箱缓冲10min，蒸馏水浸洗 3min。
2、 临用配制染色工作液，滴加覆盖切片染色15-30min
3、 其余步骤同石蜡切片
（三）细胞涂片染色
1、预冷的低级醇固定3min 或 4%组织细胞固定液固定 20min,70%乙醇浸洗2次，每次1min,
蒸馏水浸洗两次，每次 2min。,
- 染色同石蜡切片的染色步骤
- 蒸馏水洗去多余染色液
- 稍晾干
- 镜检
染色结果：
含铁血黄素或三价铁 | 蓝色 |
其他组织 | 红色 |
阴性对照（可选）
取相同连续切片脱蜡至水。置于5%的草酸中，孵育2-6h 后，经 Perla stain，步骤同上。结果为阴性。
注意事项：
1、切片脱蜡应尽量干净。
2、样本组织固定常采用10%的中性福尔马林或4%组织细胞固定液，经普通福尔马林长期固定后，组织会有损伤。
3、临用前取A1、A2液等量混合，即为试剂（A），现配现用，不可提前配制。
4、整个操作过程中容器要干净，避免使用金属铁制品，洗切片和容器时以蒸馏水为宜，因普通水内含铁质，避免铁残留造成假阳性。
5、避免使用酸性固定剂和氧化型固定液造成假阴性，铬酸盐处理也会妨碍铁的保存。
6、Perls stain染色时，应根据样品情况调整着色时间。
7、所有检查切片都应使用同一个阳性对照切片，选择适合的对照非常重要。脾脏或肺石蜡切片效果较佳；如无亦可采用铁盐溶液作阳性显色对照。
8、95%乙醇、90%乙醇应经常更换新液。
9、冰冻切片和细胞的染色，应根据具体情况摸索实验条件。
10、为了您的健康和安全，请穿实验服并戴一次性手套操作。