普鲁士蓝染色试剂盒(二价铁，增强型)说明书
货号: R04220
规格：4×20ml
英文名称：Prussian Blue Iron Stain Kit (Ferrous Iron, Enhance With DAB)
保存：2-8℃，避光保存，有效期1年
产品组成：
试剂名称 | 4×20mL | 保存 | |
试剂(A） 染色工作液Perls | 试剂（A1）:Perls A液 | 10mL | 室温，避光 |
试剂（A2）：Perls B液 | 10mL | 室温 | |
临用前按照1:1混匀即为Perls染色工作液 | |||
试剂（B）孵育液 | 20mL | 2-8℃，避光 | |
试剂(C)： 浓缩增强液 | 试剂（C1）：增强A液 | 1mL | 2-8℃，避光 |
试剂（C2）：增强B液 | 1mL | 2-8℃，避光 | |
临用前按照C1C2:1×PBS=1:1:18的比例混匀配制增强工作液，现配现用 | |||
试剂(D)：复染液 | 20mL | 室温，避光 | |
产品说明（仅供参考）:
该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
普鲁士蓝二价铁染色法是常规普鲁士蓝 (Perl's method)染色法的一个变体，能够通过形成蓝色的滕
氏蓝沉淀的形式，显示细胞和组织中非血红素二价铁。然而，对于非铁过载的细胞和组织，运用此法常常由于蓝色沉淀形成过少而呈现假阴性，对细胞衰老或药物诱导的细胞或组织铁死亡有良好的显示效果。普鲁士蓝染色试剂盒(二价铁，增强型)在常规滕氏蓝染色基础上，利用级联放大的原理对亚铁离子阳性信号进行了放大显示，适用于含亚铁离子较不丰富或沉积较少的样本二价铁染色。该产品采用高纯度原料，染色结果清晰稳定，可重复性高。
自备材料:
恒温箱或水浴锅、湿盒、1×PBS、蒸馏水
操作步骤:(仅供参考)
1、组织石蜡包埋切成3-7um 的切片。切片常规脱蜡复水。
2、试剂盒从冰箱取出复温20min至室温(25-30℃)，湿盒注水置于37恒温箱预热20min。
3、按照1:1的比例配置Perls染色工作液，滴加到切片上至完全覆盖组织，置于湿盒内37°C孵育20min。
4、取出切片，蒸馏水轻轻冲洗三次，每次10s。
5、切片滴加孵育液至完全覆盖组织，置于湿盒内37°C孵育10-20m。(见注意事项4)
6、取出切片，1xPBS 轻轻浸洗三次，每次 60s。按照C1:C2:1XPBS=1:1:18 的比例配置工作液，稀释
后的工作液可在2-8°C保存一周。
7、切片滴加增强工作液至完全覆盖组织，置于湿盒内37孵育 10-20min。 (见注意事项5)
8、(可选)取出切片，1xPBS轻轻浸洗三次，每次5s，滴加复染液染色3-5min。
9、蒸馏水浸洗10min。
10、梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
染色结果:
二价铁 棕黄色到棕褐色
细胞核 浅蓝色
细胞质 浅棕色或无色
注意事项:
1、避免使用酸性固定液处理组织，铬酸盐处理也会影响铁的存在。
2、该试剂盒可用于石蜡切片、冰冻切片、培养细胞和塑封切片的多种类型样本染色，但是受限于二价铁稳定性，常规石蜡切片只能用于定性判定。如需更高精度建议组织灌注染色后取材制备切片，如无法灌注建议制备速冻切片染色。
3、所有工作液久置容易失效，建议现用现配，在2小时内使用完毕。
4、孵育工作液孵育时间建议参考组织大小和细胞密度进行适当调整。
5、增强工作液处理建议镜下控制着色程度，当阳性细胞着黄棕色到棕黑色时即可。
6、如无法保证37°C恒温处理可根据室温适当延长或缩短处理时间。
7、产品信息仅供参考。本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。