普鲁士蓝染色试剂盒(三价铁，增强型)说明书
货号: R04230
规格：4×10mL/4×20mL
英文名称：Prussian Blue Iron Stain Kit (Ferric Iron,Enhance With DAB)
保存：2-8℃,避光保存,有效期1年
产品组成：
试剂名称 | 4×10mL | 4×20mL | 保存 | |
试剂(A） 染色工作液Perls | 试剂（A1）:Perls A液 | 5mL | 10mL | 室温，避光 |
试剂（A2）：Perls B液 | 5mL | 10mL | 室温 | |
临用前按照1:1混匀即为Perls染色工作液 | ||||
试剂（B）孵育液 | 10mL | 20mL | 2-8℃，避光 | |
试剂(C)： 浓缩增强液 | 试剂（C1）：增强A液 | 0.5mL | 1mL | 2-8℃，避光 |
试剂（C2）：增强B液 | 0.5mL | 1mL | 2-8℃，避光 | |
临用前按照C1C2:1×PBS=1:1:18的比例混匀配制增强工作液，现配现用 | ||||
试剂(D)：复染液 | 10mL | 20mL | 室温，避光 | |
产品说明（仅供参考）:
该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
普鲁士蓝反应(Prussian Blue Reaction)是一种对含有颗粒铁的细胞或组织中的非血红素铁(含铁血黄素铁转运蛋白、铁沉积等)进行染色的方法。在缺血性贫血、溶血性贫血、血色素沉着症和血色素代谢异常等疾病验证方面起重要作用，联合其他增强试剂也可用于铁死亡模型的检测。
普鲁士蓝反应受限于反应原理和成像设备精度仅能用于铁过载或铁沉积染色观察，对于含铁不丰富样本或非铁过载型铁死亡模型染色效果较差。普鲁士蓝染色试剂盒 (三价铁，增强型)在常规普鲁士蓝染色的基础上引入了增强剂，利用级联放大的原理对阳性信号进行了放大显示，适用于含铁较不丰富或铁沉积较少的组织三价铁染色。
自备材料:
恒温箱或水浴锅、湿盒、1×PBS、蒸馏水
使用说明（仅供参考）
1、自备材料:恒温箱或水浴锅、湿盒、1×PBS、蒸馏水
2、操作步骤:(仅供参考)
(1)组织石蜡包埋切成3-7µm的切片，切片常规脱蜡复水。
(2)试剂盒从冰箱取出复温20min 至室温(25-30℃)，湿盒注水置于37C恒温箱预热20min。
(3)按照1:1的比例配置Perls 染色工作液，滴加到切片上至完全覆盖组织，置于湿盒内37℃孵育 20min。
(4)取出切片，蒸馏水轻轻冲洗三次，每次10s。
(5)切片滴加孵育液至完全覆盖组织，置于湿盒内37℃孵育10-20min。 (见注意事项4)
(6)取出切片，1×PBS 轻轻浸洗三次，每次 60s。按照C1:C2:1×PBS=l:1:18 的比例配置工作液，稀释
后的工作液可在2-8°C保存一周。
(7)切片滴加增强工作液至完全覆盖组织，置于湿盒内 37°C孵育 10-20min。 (见注意事项5)
(8)(可选)取出切片，1×PBS轻轻浸洗三次，每次5s，滴加复染液染色3-5min。
(9)蒸馏水浸洗10min，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
染色结果:
含铁血黄素、三价铁 棕黄色到棕褐色
细胞核 浅蓝色
细胞质 浅棕色或无色
注意事项:
- 避免使用酸性固定液和鳌合剂处理组织，铬酸盐处理也会影响铁的存在
- 所有工作液久置容易失效，建议现用现配，在2小时内使用完毕。
- 孵育工作液孵育时间建议参考组织大小和细胞密度进行适当调整。
- 增强工作液处理建议镜下控制着色程度，当阳性细胞着黄棕色到棕黑色时即可。
- 如无法保证37°C恒温处理可根据室温适当延长或缩短处理时间。
6、产品信息仅供参考。本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。