酸性磷酸酶染色液 (硝酸铅法/金属沉淀法 )

酸性磷酸酶染色液（铅法）

货号：R04970

规格：2×50ml

有效期：6个月。

产品内容： 

产品简介：

酸性磷酸酶（Acid phosphatase，ACP）分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内。各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜pH为4.5-5.5。

酸性磷酸酶染色液以β-甘油磷酸钠为底物，在酸性pH下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸盐，遇到铅离子则生成磷酸铅沉淀，再被S2⁺置换，最终生成硫化铅棕黑色沉淀。酸性磷酸酶的一般抑制剂为氟化物、磷酸根离子。对某些酸性磷酸酶来讲，Cu²⁺、酒石酸根离子和四氯化碳以及醛类也都是抑制剂，Mn²⁺为该酶的激活剂。冰冻切片和石蜡切片均可，但多用冰冻切片。临床上，改染色法对前列腺癌和其他脏器的转移性前列腺癌呈强阳性反应，霍奇金淋巴瘤、胃癌、肺癌、乳腺癌、舌表皮性癌、多核巨细胞瘤的瘤细胞质也呈强阳性反应，Ewing肉瘤、成骨肉瘤等呈阴性反应。

自备材料： 

蒸馏水、恒温箱、封片剂

操作步骤(仅供参考)： 

（一）冰冻切片染色

1. 冰冻切片至蒸馏水。
2. 切片入ACP孵育液，置于37℃温箱，浸染15-60min。
3. 入37℃蒸馏水中洗2次，每次1min，以去除未被吸附的铅。
4. 在上述过程中配制ALP硫化工作液，即取试剂（B）用蒸馏水稀释50倍，即为ALP硫化工作液，即配即用。切片入硫化工作液，孵育1-2min。
5. 流水冲洗3-5min，蒸馏水洗。
6. （可选）核固红复染细胞核，蒸馏水洗。甘油明胶封片。

（二）石蜡切片染色

1、石蜡切片脱蜡至蒸馏水。

2、切片入ACP孵育液，置于37℃温箱，浸染4-12h，可以延长至24h。

3、入37℃蒸馏水中洗2次，每次1min，以去除未被吸附的铅。

4、在上述过程中配制ALP硫化工作液，即取试剂（B）用蒸馏水稀释50倍，即为ALP硫化工作液，即配即用。切片入硫化工作液，孵育1-2min。

5、流水冲洗3-5min，蒸馏水洗。

6、（可选）核固红复染细胞核，蒸馏水洗。甘油明胶封片。

染色结果： 

阴性对照：（可选）

将切片置于试剂（C）-ACP对照液中，室温1-2h孵育，其余步骤相同，结果为阴性。

注意事项： 

1. ACP孵育液、ACP硫化液易失效，最好分成小分储存。ACP硫化液具有腐蚀性。
2. 对冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。
3. 样本需新鲜，取材后应立即处理，否则会影响酶的活性。
4. 组织固定需在4℃冰箱进行，时间不宜超过24h，否则酶活性会减弱或消失。
5. 组织在石蜡包埋是，温度不宜高于56℃。应使用熔点为52-54℃的石蜡进行浸蜡，浸蜡时间要短，否则酶活性会减弱或消失。
6. 不纯的二甲苯会分解黑色沉淀，宜选用AR级以上的二甲苯。
7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。