细胞自噬染色检测试剂盒 (MDC )

细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)

货号：R05350

规格：100T

保存：-20℃避光保存，有效期1年。

产品内容：

产品说明：

自噬(autophagy)是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器，最终将吞噬物在溶酶体内降解的过程，自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构，内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白聚集物，损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、病毒和细菌等。

单丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine，MDC)是一种荧光色素，是嗜酸性染色剂，通常被用于检测自噬体形成的特异性标记染色剂，其检测激发滤光片波长355nm。阻断滤光片波长512nm。细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)，适用于培养细胞的自噬染色，又称为MDC染色液，可与EB合用双染。

自备材料：荧光显微镜、低速离心机、EB染色液、载玻片、盖玻片

操作步骤（仅供参考）：

1. 悬浮细胞染色：
2. 10×清洗液用去离子水稀释至1×清洗液。
3. 800g离心5min，收集细胞，用300~400μL的1×清洗液清洗细胞1次，弃上清。
4. 加入适量的1×清洗液重悬细胞，计数并调节细胞浓度至10⁶/mL。
5. 取90μL的细胞悬液至新的EP管中，加入10μL的MDC染色液，轻轻混匀。室温避光染色15~30min。(见注意事项1)
6. 800g离心5min，收集细胞，用300~400μL的1×清洗液清洗细胞2次，弃上清。
7. 加入100μL的缓冲收集液重悬细胞，滴加于载玻片上并加盖玻片。
8. 荧光显微镜下观察(阻断滤光片波长512nm)，计数并拍照。
9. 贴壁细胞染色：
10. 10×清洗液用去离子水稀释至1×清洗液，去除培养基并用1×清洗液清洗细胞。
11. 用1×清洗液将适量MDC染色液稀释10倍，然后加到孔板里室温避光孵育15~30min。(见注意事项2)
12. 染色后用1×清洗液清洗2次，每次3min。
13. 倒置荧光显微镜下观察(阻断滤光片波长512nm)，计数并拍照。

染色结果：

注意事项：

1. MDC染色液和EB试剂合用可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。有一定毒性，请小心操作。如需联合染色可在加入MDC染色液的细胞悬液中加入终浓度为0.2μM的EB染色液，后续正常操作。
2. 可按照孔板添加培养基体积减半的原则加入10倍稀释的MDC染色液，也可根据细胞数酌情调整稀释比，避免浓度过高产生假阳性。
3. 操作过程中应注意减少试剂暴露于强光下的时间。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。