乙酰胆碱酯酶染色液(铅铜硫胆碱法)
货号：R05670
规格：3×20ml/3×50ml
保存：-20℃ 避光，6个月。
产品组成：
名称 | 4×20ml | 4×50ml | Storage | |
试剂(A): AChE孵育液 | A1: AChE Iodide | 48mg | 120mg | 4℃ 避光 |
A2: AChE Buffer A | 18.4ml | 46 ml | RT | |
A3: AChE Buffer B | 0.8ml | 2ml | 4℃ 避光 | |
A4: AChE Buffer C | 0.8ml | 2ml | 4℃ 避光 | |
A5: Iso-OMPA | 0.4ml | 1ml | -20℃ 避光 | |
试剂(B): AChE漂洗液 | 2×20ml | 2×50ml | RT | |
试剂(C): AChE硫化液 | 2×1ml | 3×1ml | RT避光 | |
试剂(D): AChE-ChE抑制剂 | 0.4ml | 1ml | 4℃ 避光 | |
产品说明：
胆碱酯酶(cholinesterase)属于特异性酯酶，可分为两大类。一类是乙酰胆碱酯酶(Acetyl cholinesterase，AChE)又称为真性胆碱酯酶，能水解乙酰胆碱，起到生理的调节作用；另一类为胆碱酯酶，又称假性胆碱酯酶(Pseudo cholinesterase，PsChE)，能水解胆碱的酯而不能水解乙酰胆碱酯。乙酰胆碱酯酶主要存在于神经元的胞质内、神经与肌肉接头处即所谓运动终板处；PsChE主要存在于血浆、胰腺、唾液腺内，生理功能尚不明确。显示乙酰胆碱酯酶的方法有Koell法、Snell和Garrett法、Karnovsky和Roots法等。
乙酰胆碱酯酶染色液(铅铜硫胆碱法)染色原理是乙酰胆碱酯酶水解碘化乙酰硫代胆碱，释放乙酸和硫代胆碱，磷酸盐与铅离子形成磷酸铅沉淀，再被S2+置换，形成硫化铅沉淀。其优点是操作简便、酯酶的扩散较少，其缺点是对底物对组织的渗透性较差，有可能出现假阳性。
自备材料：
- 10%甲醛钙固定液
- 恒温培养箱
- 光学显微镜
操作步骤（仅供参考）：
1、冰冻切片，厚6um，不固定或置于预冷的10%甲醛钙固定。
2、蒸馏水洗2次，每次3min。
3、配制AChE 孵育液：临用前，取AChE Iodide buffer加入至AChE Iodide，使后者完全溶解，即为A12混合液，4℃保存。取适量的A12混合液、A3、A4、A5，按A12混合液：A3：A4:A5=46:2:2:1充分混合，即为AChE孵育液，3h内使用。
4、切片人预温的AChE孵育液中，37℃避光孵育10-30min。
5、蒸馏水洗5min，镜下观察如活性部位仍较淡，可于蒸馏水洗后再进行孵育，至反应合适为止。
6、入AChE漂洗液充分漂洗，如AChE漂洗液用量过大，可用PBS代替。
7、在上述过程中配制ALP硫化工作液，即取适量的试剂C用蒸馏水或者去离子水稀释50倍，即为ALP硫化工作液，即配即用。切片入ALP硫化工作液孵育。
8、流水冲洗10min。甘油明胶封片。
染色结果：
AChE酶活性部位 | 棕黑色 |
阴性对照(可选)：
取配制好的AChE孵育液，按AChE孵育液: AChE-ChE抑制剂=50:1充分混合。取相同切片入含AChE-ChE抑制剂的AChE孵育液中，其余同上，呈阴性反应。
注意事项：
- 本染色液适用于冰冻切片，同时应减少切片在室温暴露的时间。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。