油红O染色液(细胞专用) 使用说明书
货号：R05780
规格：4*20ml/4*50ml
有效期：12个月。
试剂盒成分：
名称 | 4×20ml | 4×50ml | Storage | |
试剂(A): ORO Fixative | 20ml | 50 ml | RT 避光 | |
试剂(B): ORO Stain | B1: ORO Stain A | 12 ml | 30 ml | 4℃ 避光 |
B2: ORO Stain B | 8 ml | 20ml | RT | |
按B1:B2=3:2比例混合静置10min, 即为ORO Stain，不宜提前配制；配好后，若有沉淀， 过滤之后再使用。 | ||||
试剂(C): Mayer苏木素染色液 | 20ml | 50ml | 4℃ 避光 | |
试剂(D): ORO Buffer | 20ml | 50ml | RT | |
产品说明：
脂质(Lipid)是中性脂肪、类脂及其衍生物的总称，其共同的物理特性是不溶于水，易溶于有机 溶剂(如乙醇、乙醚等)。人体的脂肪主要有两种：1、储存脂肪，如中性脂肪，主要分布于皮下、肾、胰腺等部位。2、结构脂肪，如类脂(磷脂、糖脂、胆固醇等)，主要分布于细胞内。中性脂肪(Neutral fat)是由三分子脂肪酸和一分子甘油组成的脂类，呈中性。中性脂肪是储存能量的方式之一，在氧化时释放出能量。中性脂肪染色经常采用苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、苏丹黑B、油红O法等。传统方法采用苏丹染料，最近发现偶氮染料油红O更适合脂肪的染色。油红O是很强的脂溶剂和染脂剂， 较易与甘油三脂结合呈小脂滴状，与磷脂结合力稍差，其染色原理一般认为是物理上的溶液作用或吸附作用，借溶液作用使脂肪染色。染料在细胞内脂质的溶解度较原溶剂中的溶解度更大，所以在染色时染料就从有机溶剂转移入脂质而使脂肪染色。
油红O染色液(细胞专用)简称ORO染色液，可显示最小的脂滴，可优先为脂类从溶剂中吸附染料。标本不采用含有乙醇的固定液，如需要固定可采用10%福尔马林)。脂肪阳性染色结果呈橘黄至红色，但具体颜色因脂质浓度而定。
自备材料：
60%异丙醇、蒸馏水
操作步骤（仅供参考）：
一、培养细胞
1、移除细胞培养基，用PBS洗两次，加油红O固定液固定20-30min。
2、弃去固定液，用蒸馏水洗2次，加入60%异丙醇浸洗20-30s。
3、弃去60%异丙醇后加入新配制好的油红O染色液，浸染10-20min。
4、弃去染色液，60%异丙醇漂洗20-30s至间质清晰。水洗2-5次（可自行优化），直到无多余染液。
5、加入Mayer苏木素染色液，复染核1-2min。弃去染液后水洗2-5次，加入油红O缓冲液孵育 1min，弃去
6、加入蒸馏水覆盖细胞并在显微镜下观察。
二、细胞涂片
1、制备新鲜骨髓、血液涂片，入油红O固定液固定10-15min，取出涂片，空气中晾于10-15min。
2、入新配制好的油红O染色液，浸染15min。入60%异丙醇漂洗20-30s，流水冲洗，入蒸馏水稍微清洗
3、入Mayer苏木素染色液，复染核2min，入油红O缓冲液1 min，镜下观察染色结果。
染色结果:
中性脂肪 橙红色或橘红色
磷脂 粉红色
细胞核 蓝色
注意事项：
1、ORO染色液不够稳定，易产生沉淀，不宜提前配制。
2、Mayer 苏木素染色液复染时间不能过长。
3、试剂B2在低温储存和运输时会变浑浊属于正常现象，沸水浴5min即可恢复澄清正常使用。
4、染色结果不能长期保存，应尽快观察及照相。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。