脂质荧光染色试剂盒 (尼罗红法 )

脂质荧光染色试剂盒（尼罗红法）说明书

货号：R05910

规格：2×50ml

保存：-20℃，避光保存，有效期1年。

产品组成：

产品说明：

脂质是一种低极性（疏水性）的天然大分子混合物，包括脂肪酸及其衍生甘油酯和磷脂，以及固醇类物质，例如胆固醇。细胞浆脂滴的形成是正常细胞生理过程，脂滴由中性脂质构成，通常为甘油三酯脂滴，作为能量储备；少部分为胆固醇酯脂滴，作为过多细胞胆固醇的存储。尼罗红(Nile red)染色剂是一种亲脂性的恶嗪类黄光染料。与腊酯、甘油三酯以及各种脂肪酸等脂类物质结合后，在激发波长543nm的激发下，显示强烈橘黄色荧光(散发波长598m)。同时在紫外光的照射下显示红色。

脂质荧光染色试剂盒（尼罗红法）优点在于提供复合荧光染色液，可同时对脂类物质和细胞核进行组织原位染色。在绿光激发下，脂滴呈橘黄色，在紫外光激发下，细胞核呈蓝色，适用于冰冻切片和细胞样本。本产品为即用型试剂盒，性能稳定，着色清晰灵敏。

自备材料：1×PBS、1.5毫升离心管、荧光显微镜

操作步骤：（仅供参考）

临用前取出试剂(B1)和试剂（B2）放置恢复至室温，按B1:B2=1:200的比例配制染色工作液，避免光照，然后进行下列操作。

1. 冰冻切片染色
2. 取出待测的冰冻切片，复温3min。
3. 向切片上滴加试剂(A):固定液，铺满整个组织，室温固定15-20min。1×PBS洗3次，每次1min。
4. 向切片上滴加染色工作液，室温避光孵育10min。
5. 1×PBS清洗切片1-2次，每次30s，至无红色染料脱出。
6. 加上盖玻片制备临时切片或使用抗荧光衰减封片剂封片，然后在荧光显微镜下观察：激发波长543nm，散发波长598nm（脂滴着色）和紫外光（核着色）
7. 贴壁细胞染色
8. 小心吸除培养皿或六孔板里的培养液。
9. 小心加入1ml 1×PBS，温柔清洗细胞表面，重复1-2次每次30s。
10. 小心吸除培养皿或六孔板里的清洗液。
11. 加入1ml 试剂(A):固定液,覆盖细胞表面，固定10-15min。小心吸除固定液。
12. 加入1ml 1×PBS，清洗细胞表面，重复1-2次。小心吸除清洗液。
13. 加入适量染色工作液，室温避光孵育10min，小心吸除染色工作液。
14. 小心加入1ml 1×PBS，摇晃清洗细胞表面30s-1min，重复1-2次。
15. 最后一次清洗液不弃去，注意避光保存并在30min内用荧光显微镜下观察：激发波长543nm，散发波长598nm（脂滴着色）和紫外光（核着色）。

染色结果：

注意事项：

1. 染色工作液现用现配，不宜提前配置。
2. 根据组织和细胞的差异，可以适当调整染料稀释比例（1：100-1：400）,以增强或降低荧光强度。
3. 细胞培养液里避免使用脂类物质。染色孵育和观察时，避免强光照射，以免荧光淬灭。
4. 使用时，试剂(B1)：染色液避免反复冻融，可分装成小规格进行保存。
5. 建议染色完成后，即刻进行荧光检测分析，如没有荧光显微镜，可以选择紫外下观察。
6. 产品信息仅供参考。本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。