植物过氧化氢染色液(DAB,pH3.8)说明书
货号: R05940
保存：2-8℃，避光，1年
产品组成：
3×100ml | ||
试剂（A）：DAB | 100mg | 2-8℃，避光 |
试剂（B）：磷酸盐缓冲液（pH3.8） | 100ml | RT |
试剂（C）：DAB样本保存液 | 2×100ml | RT |
使用说明书 | 1份 |
产品说明（仅供参考）:
该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
植物组织在胁迫环境条件下会产生多种活性氧 (ROS)，ROS 活性非常大且极其不稳定，因此 ROS 的检测通常因其最终产物而定。过氧化氢是活性氧的一种。在过氧化氢酶的催化下，过氧化氢能与 DAB (3,3-二氨基联苯胺四盐酸盐) 迅速反应生成棕红色化合物从而定位组织中的过氧化氢。植物过氧化氢染色液(DAB，pH3.8)根据上述基本原理也称为 DAB 染色法，用于植物活组织中的过氧化氢染色。一般应用于较嫩的根尖、叶片等的整体染色，染色后有过氧化氢聚集的部位呈棕色至深棕色。该产品仅用于科研领域，不用于临床诊断或其他用途。
使用说明（仅供参考）
自备材料：新鲜的植物叶片或根、自来水、蒸馏水、95%乙醇、超声波、磁力搅拌器、电子天平、滤纸、照相机
操作步骤(仅供参考):
- 试剂准备：将 100 mg DAB 加入到 100 mL磷酸缓冲液中充分解，即得 DAB 染色工作液，4°C避光保存，一周内有效，-20°C保存，可适当延长保质期。注: DAB 对光敏感溶解过程需要避光，如果较难溶解，可通过超声、磁力搅拌等方法促溶。
- 样本准备：采集经胁迫(例如重金属)的植物幼苗或根尖，自来水稍洗净，置于滤纸上吸干多余的水分。
- 染色：将植物幼苗或根尖浸没在 DAB 染色工作染液中，常温避光染色 2~6 h，至阳性部位出现深棕色，其余部位近无色或者呈植物本身的颜色即可。(根据植物幼嫩程度和显色程度调整染色时间)
- 脱色：用摄子将植株幼苗或者叶片小心取出，浸入蒸馏水中来回漂洗 3~5 次，置于滤纸上吸干多余水分后，浸入 95%乙醇中40℃处理3~16 h，目的是脱去植株幼苗或者叶片本身的叶绿素，脱色期间可多次更换新鲜的 95%乙醇
5、观察：用子取出植株幼苗或者叶片，浸入蒸馏水中来回漂洗 3~5 次，置于滤纸上吸干多余水分后，将样本转入适量 DAB 样本保存液中浸泡 30 min，随后可取出拍照。样本可置于该保存液中常温保存一周
注意事项:
- DAB 染色工作液配制好以后需 4°C避光保存，一周内使用。存放时间过久，会影响显色
- 因过氧化氢容易分解，且任何外在因素都可能刺激植物应激产生过氧化氢，因此植物样本需要新鲜采集，并尽快完成染色。建议做阴性及阳性空白对照组.
3、样本染色完成后尽快拍照保存结果。
4、DAB 可能具致癌性，请小心操作，避免直接接触.
5、染色和脱色步骤也可参考如下建议操作：组织放入染液中，抽真空，-0.1MPa 保持负压20~30min，再于室温下静置染色 60min，弃染色液，加入 95%乙醇，于70~80°C水浴锅脱色，每隔 10min 换一次 95%乙醇，待样品绿色全部褪去后可停止脱色
6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。