碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)
货号：R08050
规格：4×2ml/4×10ml/4×20ml
保存：-20℃，6个月有效。
产品组成：
名称 | 4×2ml | 4×10ml | 4×20ml | 保存 | |
试剂(A): ALP固定液 | 2ml | 10ml | 20ml | RT 避光 | |
试剂(B): ALP孵育液 | B1: AS-BI染色液 | 1ml | 5ml | 10ml | -20℃ 避光 |
B2: FBB染色液 | 1ml | 5ml | 10ml | -20℃ 避光 | |
临用时，取B1:B2 =1:1比例混合，即为ALP孵育液，即配即用。 | |||||
试剂(C): 核固红染色液 | 2ml | 10ml | 20ml | 4℃ 避光 | |
试剂(D): 甲基绿染色液 | 2ml | 10ml | 20ml | RT 避光 | |
产品简介：
碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH 9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜)，如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮，还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜。
碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)不是采用金属沉淀法来显示碱性磷酸酶活性，而是采用偶氮偶联法(又称同时偶联法)，其原理是在pH9.2～9.8的碱性条件下，细胞内碱性磷酸酶可使AB-BI磷酸盐水解，释放出磷酸不萘酚，后者与偶联重氮盐生成有色产物，定位于细胞质中。该染液可用于血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、梯度入水后的石蜡切片等的碱性磷酸酶染色，碱性磷酸酶活性部位呈蓝色，位于胞桨，结果较金属盐沉淀法可靠。
自备材料：
1、载玻片、湿盒
2、普通光学显微镜
操作步骤(仅供参考)：
一、涂片或切片
1、血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、脱蜡后石蜡切片入ALP固定液处理3min。
2、蒸馏水稍洗5-10s。
3、滴加配制好的ALP孵育液，放入湿盒中，避光孵育15～20min，水洗。
4、入核固红染色液或甲基绿染色液复染3～5min。
5、水洗、镜检或甘油明胶封固后镜检。
二、贴壁培养细胞
1、取6孔板或其他容器培养的细胞，弃液，PBS清洗干净。
2、加入ALP固定液固定3min或4%多聚甲醛固定10～15min，蒸馏水清洗。
3、滴加配制好的ALP孵育液，放入湿盒中，避光孵育15～20min，蒸馏水清洗。
4、入核固红染色液或甲基绿染色液复染3～5min。
5、PBS清洗、镜检。
染色结果：
ALP活性部位 | 蓝色 |
细胞核 | 红色(核固红)或绿色(甲基绿) |
血液、骨髓涂片结果判断：
一般以积分报告结果，根据100个中性粒细胞阳性颗粒进行0-4计分。
细胞分值 | 染色特点 |
0 | 无颗粒 |
1 | 稍有颗粒 |
2 | 中等程度颗粒 |
3 | 多数颗粒 |
4 | 充满颗粒 |
注意事项：
- 血液或骨髓细胞涂片或其他样本均应新鲜，薄厚适宜，及时固定，否则会影响酶的活性。
- 培养细胞染色操作过程中，清洗、染色等步骤都应轻微，以免损伤或丢失细胞。
- ALP孵育液易失效或降低阳性强度，即配即用，不宜久置。
- 复染时，核固红染色液或甲基绿染色液二者取其一。
- 每次染色时，应有阳性对照片。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。