1000×拟南芥营养液 (3种母液 )

1000×拟南芥营养液（3种母液）说明书

货号: W16250

规格：1L

英文名称：Arabidopsis thaliana nutrient salts Solution

产品性状：大量元素A、大量元素B无色澄清；微量元素棕色澄清

工作溶液pH:约5.7

运输条件:常温运输

保存：2-8℃，1年

产品说明（仅供参考）:

该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

金克隆出品的1000×拟南芥营养液，也有实验室称为PNS营养液，分为3个组分，2-8℃可储存12个月，分别称取3次即可快速配制pH值为5.7的营养液，无需调整pH值。使用方便快捷。

产品组成：

使用方法：

1.根据用量，分别称取相同体积的三种储存液，依次加入1000倍体积的水中，混匀。

2. 本品配制完成后pH 值为5.7,无需调整。如有特殊要求，可根据要求调整pH 值。

3. 施入配制好的营养液。

注意事项：

1.大量元素低温储存可能会有析出情况，恢复常温完全溶解即可使用。

2. 三种母液不要同时加入，避免产生沉淀。

拟南芥培养方法：

拟南芥生长的适宜温度白天为22℃-24℃,夜温20-22℃,适宜的湿度为60-70%,生长期适宜的光强为150μmol·S-1·M-²(6支 3 6W 日光灯下35 cm 处测得)。幼苗期不耐高光强，可适当遮荫。光质也较重要，应选用植物生长专用的日光灯。拟南芥属于长日照植物，在日照长于12h 下才会开花，一般拟南芥生长室的日照长度定于14-16h 为佳。

1. 准备育苗培养基：

2 . 29 g/L 1/2 MS,Sucrose:10g/L,pH5.7,Agar:0.7-0.8%.121℃ 灭菌15分钟，60℃左右在超净台内分装入直径100mm 培养皿(25mL)。

2. 种子消毒：种子放在1.5mL 离心管中，加入1mL 的种子消毒液(2% NaClO (市售10%溶液)和0 . 1%

Triton-X100), 消毒10min (移液器反复吸吹),用无菌水洗5次以上(移液器反复吸吹)。

3. 点种：种子里可多加些水，用移液器吸取种子，均匀铺到培养皿上，可根据需要选择种植的密度(一 般不超过30株，不要太密，否则根缠在一起不好移苗),用移液器吸除培养基表面上的水，并置于超净

台内吹干培养皿表面上的水，密封盖子，4℃暗处理两天后(春化),移到光照培养箱(22℃,光周期12h), 两周后再移苗。若种子较密，光照培养箱中生长1周则要移苗，且需适当遮荫。

4. 移苗：将蛭石与珍珠岩按3:1的比例混好作为基质，装入营养钵，将营养钵放入不透水的平底塑料育苗盘，在育苗盘中加水至3cm 高，水就会通过营养钵的底孔渗入，待基质湿透即可移苗。用镊子轻轻从培 养皿中连根拉出小苗，把根平放在蛭石表面，用镊子把根轻轻压入基质内，移苗后用保鲜膜覆盖营养钵3-4 天。从苗期直至开花，每隔2-3天浇一次水，始终保持育苗盘内有1-3cm 的水层，整个生长期浇3-4 次拟南芥营养液。在收种期，不要浇水，保持育苗盘干燥。

5. 收种：在种荚变黄，变干时收种。将种子抖落容器内，收集后用筛网除去杂质，将种子装入小纸袋中，标记好，置于干燥的环境中待种子进一步干燥后，封存于1.5mL 离心管。

拟南芥的转化方法：

渗透培养基配制：2.29g/L1/2MS (大量元素减半);5%蔗糖；0 . 5%MES; 用 KOH 调至pH5.7; 再加：10μL/L 的6-BA 母液(1mg/mL, 乙醇溶解);200μL/LSilwet L-77(在蔗糖溶解后加入，否则蔗糖很难溶解)。经转化的拟南芥，种子收获后需在相应的抗性平板上筛选转化子。

1. 制备好已转化了相应质粒的农杆菌菌液10mL, 转入200mL 大瓶过夜培养，农杆菌液 OD600 1.2-1.6即可。

2. 室温5000 rpm 离心15分钟。

3. 弃上清，将农杆菌沉淀悬浮于相应体积的渗透培养基里， OD600 在0.8左右为宜。

4. 直接将拟南芥的花浸入农杆菌悬浮液，持续几秒钟，取出再浸入，反复3-5次。浸染后的植株平放在带 有盖子的育苗盘中，或者用保鲜膜盖好，以保持湿度。移入恒温室避光培养24小时，第二天揭膜，正常光照培养。

转化子的筛选：

1. 种子消毒：用种子消毒液(2% NaClO 和0 . 1% Triton-X100) 处理10分钟(移液器反复吸吹);然后用

无菌水洗5次(移液器反复吸吹)。

注意：消毒时间不宜过长，否则影响种子发芽。

2. 处理后的种子用移液器均匀涂布在固体筛选培养基表面。不宜过密，切忌将种子堆叠在一起。如种子 特别容易污染，可在固体筛选培养基中加入工作浓度为250μg/mL 的头孢霉素 (SL4090) 抑制农杆菌的生长。

3.4℃避光春化2到3天，移入22℃恒温箱培养。

4. 观察种子在固体筛选培养基上生长情况，相比于其他萌发的幼苗，具有长根的幼苗可确定为转化子时，将转化子移栽至浇透拟南芥营养液的人工基质上培养。